丹参脱毒苗的工厂化繁育方法技术

本发明专利技术涉及丹参脱毒苗的工厂化繁育方法，特别是品质退化严重、产量降低、资源稀缺丹参野生种、栽培种或变异种的工厂化繁育方法，属于植物品种繁育技术领域。本发明专利技术提供一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，包括：(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养；(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养；(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养；(5)丹参幼苗的炼苗；(6)丹参幼苗的大田移栽。本发明专利技术能够实现优良丹参品种(系)或株系及珍惜濒危丹参资源的快速、工厂化繁育。

The industrialized breeding method of the detoxified Salvia miltiorrhiza

The invention relates to the industrialized breeding method of Salvia miltiorrhiza virus free seedling, especially the industrialized breeding method of serious quality degradation, reduced production and scarce resources of Salvia miltiorrhiza wild species, cultivated species or mutant species, and belongs to the field of plant breeding technology. Including the present invention provides a Salvia virus-free seedling factory breeding method: (1) selection of young leaves or stem tip Salvia detoxification treatment; (2) leaves of Salvia miltiorrhiza or shoot tip induced proliferation in the initial medium; (3) the callus differentiation culture of Salvia miltiorrhiza in differentiation medium (4; Salvia miltiorrhiza) culture medium induced seedling root culture in root; (5) seedlings of Salvia miltiorrhiza seedling; (6) Salvia miltiorrhiza seedlings transplanting. The invention can realize the rapid and factory breeding of fine Salvia miltiorrhiza (line) or plant lines and the resources of endangered Salvia miltiorrhiza.

【技术实现步骤摘要】
丹参脱毒苗的工厂化繁育方法
本专利技术涉及丹参脱毒苗的工厂化繁育方法，特别是品质退化严重、产量降低、资源稀缺丹参野生种、栽培种或变异种的工厂化繁育方法，属于植物品种繁育

技术介绍
丹参(SalviamiltiorrhzaBunge)是大宗中药材之一，具有显著的活血化瘀功效，被广泛用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性中风等疾病。目前我国以丹参为原料生产的复方中药有100多种，涉及的企业百余家，对优质丹参药材的需求量巨大。但由于常年采挖，丹参野生资源日益减少。目前市场供应的丹参主要以栽培种为主，但在丹参主产区，由于种苗生活力退化、重茬等因素影响，致使丹参的产量非常不稳定。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种高效、快速的工厂化丹参脱毒种苗繁育方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，由以下步骤组成：(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养；(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养；(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养；(5)丹参幼苗的炼苗；(6)丹参幼苗的大田移栽。所述步骤(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理的方法是：选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理。所述步骤(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养的方法是：将脱毒处理的丹参嫩叶或茎尖置于初始增殖培养基中，24±2℃(优选25℃)无菌室中，光照培养20～30天(优选25天)进行脱分化增殖培养，光强度为1000～3000Lx(优选1000Lx)，光照周期2-3h(光)/22～21h(暗)(优选1h(光)/22h(暗))获得丹参愈伤组织；所述步骤(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养的方法是：将获得的丹参愈伤组织切割成0.2～0.3cm2(优选0.25cm2)小块置于诱导培养基中进行诱导分化培养，培养条件为：24±2℃(优选25℃)，光照时间为16～18h小时(优选18小时)，获得分化的丹参幼苗；所述步骤(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养的方法是：将获得的丹参幼苗转移至根诱导分化培养基中进行根诱导培养，培养条件：24±2℃(优选23～25℃)，光照时间为16～18h小时(优选18小时)；所述步骤(5)丹参幼苗的炼苗方法是：丹参幼苗根长至2～3厘米，叶片6～8片时将培养瓶打开，进行一级炼苗处理3～4天(优选3天)；将经过一级炼苗处理的丹参幼苗，从培养基中移出，用水冲洗除掉幼苗植株上带有的培养基，将其移栽至营养土：蛭石(4∶1～2∶1体积比，优选3∶1体积比)的混合土中，置于24±2℃(优选25℃)温室大棚中，大棚湿度50～70％(优选60％)，进行二级炼苗处理12～18天(优选15天)；所述步骤(6)丹参幼苗的大田移栽的方法是：将在温室中复壮的丹参幼苗连同结合的混合土一起移栽置大田中；移栽当天浇足水，后期田间管理同常规种苗。进一步优选的丹参脱毒苗工厂化繁育方法如下：所述步骤(1)中的脱毒处理方法为依次用70～75％酒精漂洗30～50秒，无菌水漂洗1～2分钟，0.1％升汞处理漂洗8～10分钟，无菌水漂洗4～5次，每次1～2分钟。优选的，所述步骤(1)中的脱毒处理方法为依次用75％酒精漂洗30秒，无菌水漂洗1分钟，0.1％升汞处理漂洗8分钟，无菌水漂洗5次，每次1分钟。所述步骤(1)中嫩叶为最靠近丹参茎端分生区，新长出的第1～2片叶片；茎尖为丹参茎最端部的分生区，长度为0.2～0.4cm。优选的，所述步骤(1)中嫩叶为最靠近丹参茎端分生区，新长出的第2～3片叶片；茎尖为丹参茎最端部的分生区，长度为0.3cm。所述步骤(2)中所述的初始增殖培养基组成为1/2MS培养基、20～40g/L白糖、5.5～7g/L琼脂粉、0.3～1mg/L6一BA(6-苄氨基嘌呤)、0.1～0.3mg/LNAA(1-萘乙酸)，pH值5.8～6.0；丹参嫩叶或茎尖的脱分化增殖培养组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～7g/L琼脂、1～2mg/L6-BA，pH值5.8～6.0。优选的，所述步骤(2)中所述的初始增殖培养基的组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂粉、0.5mg/L6-BA、0.2mg/LNAA，pH值5.8。优选的，所述步骤(2)中的丹参嫩叶或茎尖的脱分化增殖培养基的组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂、1mg/L6-BA，Ph值5.8。所述步骤(3)中的诱导培养基组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～7g/L琼脂、0.1～0.3mg/LNAA，pH值5.8～6.0；愈伤组织大小约为0.8～1.2cm3，颜色为浅黄或淡绿色，切割成大小为0.2～0.3cm3的小块。优选的，所述步骤(3)中的根诱导培养基组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂、1.0mg/LIBA(吲哚丁酸)，pH值5.8。优选的，所述步骤(3)中的愈伤组织大小约为1cm3，颜色为浅黄或淡绿色，切割成大小为0.25cm3的小块。所述步骤(3)中的根诱导分化培养基组成为1/2MS、20～40g/L白糖、4～8g/L琼脂、0.5～1mg/LIBA，pH值5.8～6；丹参幼苗根诱导分化条件为23±2℃，光照6～10小时。所述步骤(4)丹参幼苗根诱导分化条件为23℃，光照18小时。所述步骤(5)进行一级炼苗处理的丹参幼苗根长度为5～6厘米，具有4～8片叶片。所述步骤(5)中丹参幼苗一级炼苗条件为，温度20±2℃，湿度50～65％，光照14～18小时；丹参幼苗二级炼苗条件为，温度24±2℃，湿度50～65％，光照16～18小时/天。优选的，所述步骤(5)中丹参幼苗一级炼苗条件为，温度20℃，湿度60％，光照18小时/天。优选的，所述步骤(5)中丹参幼苗二级炼苗条件为，温度25℃，湿度60％，光照18小时/天。所述步骤(6)丹参幼苗大田移栽方法为，将二级炼苗后的丹参幼苗在温室中从穴盘中逐棵取出，连同结合的混合土一起移栽置大田中，移栽当天浇足水后用干土将根覆盖并将植株扶直，后期田间管理同常规种苗。本专利技术的第二个方面，提供了一种用于丹参脱毒苗工厂化繁育的培养基，包括但不限于初始增殖培养基、嫩叶或茎尖的脱分化增殖培养基、诱导培养基和根诱导分化培养基中的一种或几种。丹参脱毒苗工厂化繁育用初始增殖培养基，组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～7g/L琼脂粉、0.3～1mg/L6-BA、0.1～0.3mg/LNAA，pH值5.8～6.0。优选组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂粉、0.5mg/L6-BA、0.2mg/LNAA，pH值5.8。丹参脱毒苗工厂化繁育用丹参嫩叶或茎尖的脱分化增殖培养基：组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～8g/L琼脂粉、0.5～2mg/L6-BA，pH值5.8～6.0。优选组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂粉、1mg/L6-BA，pH值5.8。丹参脱毒苗工厂化繁育用诱导培养基，组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～8g/L琼脂、0.1～0.3mg/LIBA，pH值5～6。优选组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂、0.2mg/LNAA，pH值5.8。丹参脱毒苗工厂化繁育用根诱导分化培养基，组成为1/2MS、20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养；(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养；(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养；(5)丹参幼苗的炼苗；(6)丹参幼苗的大田移栽。

【技术特征摘要】
1.一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养；(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养；(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养；(5)丹参幼苗的炼苗；(6)丹参幼苗的大田移栽。2.根据权利要求1所述的一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于：所述步骤(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理的方法是：选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；所述步骤(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养的方法是：将脱毒处理的丹参嫩叶或茎尖置于初始增殖培养基中，24±2℃组培室中，光照培养20～30天进行脱分化增殖培养，光强度为1500～3000Lx，光照周期16～18h(光)/6～8h(暗)获得丹参愈伤组织；所述步骤(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养的方法是：将获得的丹参愈伤组织切割成0.2～0.3cm2小块置于诱导培养基中进行诱导分化培养，培养条件为：24±2℃，光照时间为18hh，获得分化的丹参幼苗；所述步骤(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养的方法是：将获得的丹参幼苗转移至根诱导分化培养基中进行根诱导培养，培养条件：24±2℃，光照时间为18h；所述步骤(5)丹参幼苗的炼苗方法是：丹参幼苗根长至5～7厘米，叶片4～8个时将培养瓶打开，进行一级炼苗处理3～4天；将经过一级炼苗处理的丹参幼苗，从培养基中移出，用水冲洗除掉幼苗植株上带有的培养基，将其移栽至营养土∶蛭石(4∶1～2∶1体积比)的混合土中，置于20±2℃温室大棚中，大棚湿度50～70％，进行二级炼苗处理12～18天；所述步骤(6)丹参幼苗的大田移栽的方法是：将在温室中复壮的丹参幼苗连同结合的混合土一起移栽置大田中；移栽当天浇足水，后期田间管理同常规种苗。3.根据权利要求2所述的一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于：所述步骤(1)中的脱毒处理方法为依次用70～75％酒精漂洗30～50秒，无菌水漂洗1～2分钟，0.1％升汞处理漂洗8～10分钟，无菌水漂洗4～5次，每次1～2分钟。4.根据权利要求2所述的一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于：所述步骤(1)中嫩叶为最靠近丹参茎端分生区，新长出的第1～2片叶片；茎尖为丹参茎最端部的分生区，长度为0.2～0.4cm。5.根据权利要求2所述的一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述的初始增殖培养基组成为1/2MS培养基、20～30g/L白糖、5.5～7g/L琼脂粉、0.5～1mg/L6-BA、0.1～0.3mg/LNAA，pH值5.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文胜，
申请(专利权)人：许文胜，
类型：发明
国别省市：天津,12