胞苷二磷酸胆碱的纯化方法技术

本发明专利技术提供胞苷二磷酸胆碱的纯化方法，其特征在于：使含有核酸类似物且ｐＨ为０．５或以上、５．０或以下的胞苷二磷酸胆碱溶液与Ｈ型强酸性阳离子交换树脂接触，将吸附在该树脂上的胞苷二磷酸胆碱用水或离子浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ或以下的水溶液洗脱，分离纯化胞苷二磷酸胆碱。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可用作药物原料、营养食品原料的胞苷二磷酸胆碱的纯4b方法。
技术介绍
胞苷二磷酸胆碱(以下简称为CDP-胆碱)的制备方法已知有化学 合成方法(专利文献1、专利文献2)，使用微生物培养物或酶的方法(专 利文献3、专利文献4)。已知通过化学合成方法制备的CDP-胆碱的纯 化方法有使用阴离子交换树脂的方法(专利文献1)、将强酸性离子 交换树脂和弱碱性离子交换树脂组合使用的纯化方法(专利文献2), 后者的方法中使用两种离子交换树脂，虽然可以分离CDP-胆碱溶液 中所含的磷酸胆碱、胞苷-5，-一磷酸(以下简称为CMP),但是并不是 可有效分离尿嘧啶或尿苷-5，-三磷酸(以下简称为UTP)的方法。专利文献1:日本特公昭63-6558号专利文献2:日本特公平6-31306号专利文献3:日本特许第3369236号专利文献4:国际公开第99/49073号手册
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供可以简便地分离CDP-胆碱和核酸类似物 的CDP-胆;威的纯化方法。 本专利技术涉及以下(1)-(6)。(1) CDP-胆碱的纯化方法，其特征在于使含有核酸类似物且pH 为0.5或以上、5.0或以下的CDP-胆碱溶液与H型强酸性阳离子交换 树脂接触，将吸附在该树脂上的CDP-胆碱用水或离子浓度为0.1 mol/L或以下的水溶液洗脱，分离纯化CDP-月旦石咸。(2) 上述(l)的CDP-胆碱的纯化方法，其中，该CDP-胆碱溶液是 由如下得到的介质制备的溶液使具有由UTP的前体和胆碱或磷酸胆 碱生成CDP-胆碱的活性的生物催化剂与UTP前体、以及胆碱或磷酸胆碱或它们的盐在水性介质中共存，在该介质中生成并累积CDP-胆减。(3) 上述(2)的CDP-胆碱的纯化方法，其中，生物催化剂含有具有 由UTP的前体生成UTP的能力的微生物培养物或该培养物的处理物、 以及具有由UTP和胆碱或磷酸胆碱生成CDP-胆碱的能力的微生物培 养物或该培养物的处理物。(4) 上述(2)的CDP-胆碱的纯化方法，其中，生物催化剂含有催化 由UTP的前体和胆碱或磷酸胆碱生成CDP-胆碱的反应的酶。(5) 上述(4)的CDP-胆碱的纯化方法，其中，催化生成CDP-胆碱 的反应的酶选自乳清酸磷酸核糖基转移酶、乳清苷-5，-磷酸脱羧酶、 尿苦磷酸化酶、尿嘧咬磷酸核糖基转移酶、尿普激酶、尿苷酸/胞苷酸 激酶、核苷二磷酸激酶、胞苷-5，-三磷酸合成酶、磷酸胆碱转胞苷酰 酶、以及胆碱激酶。(6) 上述(l)-(5)的CDP-胆碱的纯化方法，其中，核酸类似物是选 自尿嘧啶和UTP的物质。本专利技术可以提供CDP-胆碱及其盐。实施专利技术的最佳方式本专利技术中使用的CDP-胆碱溶液只要是含有核酸类似物且pH为 0.5或以上、5.0或以下的溶液即可，可以是以任何方法制备的溶液， 所制备的CDP-胆碱溶液的pH为0.5-5.0则可以直接使用，如果比5.0 大，则可以添加盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等酸，如果pH比0.5小， 则可以添加氢氧化钠、氢氧化钾等^<，将pH调节为0.5或以上、5.0 或以下，优选1.0或以上、3.5或以下4吏用。H型强酸性阳离子交换树脂只要是H型强酸性阳离子交换树脂即 可，可以是凝胶型也可以是多孔型，具体有Dow Chemical Company />司制备的Dowex系歹'J(例如HCR國S、 HCR画W2、 Marathon C、 MONOSPHERE 650C、 MSC-1、 MONOSPHERE 88、 50Wx2、 50Wx4、 50Wx8等)、三菱化学制备的Diaion SK系歹'J(例如SK1B、SK104、 SK110、 SK112等)、三菱化学制备的Diaion PK系歹寸(例如PK208、 PK212、 PK220， PK228等)、Rohm and Haas制备的AMBERLITE系歹'J (例如IR120B、 IR124等)等。H型强酸性阳离子交换树脂的交联度只要是可以分离CDP-胆石成 和核酸类似物的交联度即可，没有特别限定，优选2-10%,进一步优 选4-6%。H型强酸性阳离子交换树脂优选以填充到柱子中的形式在本专利技术 中使用，本专利技术中使用的柱可以是任何柱。通过将含有核酸类似物且pH为0.5或以上、5.0或以下的CDP-胆碱溶液通入填充了 H型强酸性阳离子交换树脂的柱中等，与该树脂 接触，使CDP-胆碱吸附于该树脂上，例如在过填充了交联度为2-10% 的H型强酸性阳离子交换树脂的柱时，过柱速度为SV=0.1-5.0,优选 SV=0.2-3.0。通过上述吸附处理，可以将CDP-胆石威与溶液中所含的核酸类似 物例如乳清苷-5，-一磷酸(以下简称OMP)、尿苷-5，-一磷酸(以下简称 UMP)、尿苷-5，-二磷酸(以下简称UDP)、 UTP、 CMP、胞苷-5，-二磷酸 (以下简称CDP)、胞苦-5，-三磷酸(以下简称CTP)等嘧啶系核酸物质分 离并除去。即使在pH为0.5或以上、5.0或以下使含有核酸类似物中 的尿嘧啶或UTP的CDP-胆碱溶液与该树脂接触，它们也几乎或者完 全不吸附在该树脂上，因此特别适合分离除去尿嘧啶或UTP。吸附于H型强酸性阳离子交换树脂的CDP-胆碱通过将离子浓度 为0.1mL/L或以下、优选0.03mL/L或以下的水溶液、进一步优选水 过柱等进行洗脱，由此，CDP-胆碱可从树脂中洗脱，可分离纯化CDP-胆碱。通过上述洗脱步骤，所收集的含有CDP-胆碱的液体可以根据需 要，使用活性碳处理或者是使用非极性多孔质合成吸附剂例如三菱化 学制备的Diaion HP系列(例如HP20、 HP21等)、三菱化学制备的Diaion SP800系列(例如SP825、SP850等)、三菱化学制备的Diamond ionSP200 系列(例如SP207等)、Rohm and Haas制备的AMBERLITEXAD系列(例 如XAD4、 XAD7HP、 XAD16HP、 XAD1180、 XAD2000等)等进行脱 色处理。上述含有CDP-胆碱的液体或脱色液可用酸或碱调节至pH 2.0-4.0，根据需要浓缩后，将CDP-胆碱的浓度调节至50-800 g/L,优 选100-700 g/L,使用有机溶剂、优选丙酮、乙醇、曱醇、丙醇等亲水性的有机溶剂获得CDP-胆碱晶体。将上述含有CDP-胆碱的液体或脱色液可用氢氧化钠调节至pH 5.0-9.5，根据需要浓缩后，将CDP-胆碱浓度调节至50-800 g/L,优选 100-700 g/L，使用有机溶剂、优选丙酮、乙醇、曱醇、丙醇等亲水性 的有机溶剂获得CDP-胆碱钠盐晶体。使用有机溶剂获得CDP-胆碱晶体的方法例如有向CDP-胆碱溶 液中添加有机溶剂，使晶体析出的方法；或者是向大量的有机溶剂中 滴加CDP-胆石威溶液，^f吏晶体析出的方法。本专利技术中，含有核酸类似物的CDP-胆碱溶液只要是含有CDP-胆 碱和核酸类似物的溶液即可，可以是任何溶液，可以是通过化学合成 法，以及使用具有由UTP的前体和胆碱或磷酸胆碱生成CDP-胆碱的 活性(以下简称为C D P -胆碱生成活性)的生物催化剂的方法制备的溶液o该生物催化剂可以是具有CDP-胆碱生成活性的微生物的培养物、 该培养物的处理物、本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＣＤＰ－胆碱的纯化方法，其特征在于：使含有核酸类似物且ｐＨ为０．５或以上、５．０或以下的胞苷二磷酸胆碱（以下简称为ＣＤＰ－胆碱）溶液与Ｈ型强酸性阳离子交换树脂接触，将吸附在该树脂上的ＣＤＰ－胆碱用水或离子浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ或以下的水溶液洗脱，分离纯化ＣＤＰ－胆碱。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：村田英城，目代强，盐见道夫，
申请(专利权)人：协和发酵工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]