利用昆虫细胞高效表达人尿激酶原及其它有用蛋白质的方法技术

本发明专利技术通过基因工程技术，构建了新型高效表达的昆虫核多粒包埋型多角病毒转移载体。该质粒多角体蛋白启动子基因结构完整，３′－端同源序列区小于普通转移载体质粒，人尿激酶原基因被插入到该质粒中，得到了高效表达。通过在培养的昆虫细胞中进行同源重组得到含人尿激酶原基因的重组昆虫核多粒包埋型多角体病毒。由此感染的昆虫细胞高活性高效表达人尿激酶原并直接分泌到培养基上清中。单克隆抗体亲和层析一步法回收与纯化表达的人尿激酶原蛋白质。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用昆虫高效表达人尿激酶原及其他有用蛋白质的方法，其特征在于用重组体杆状病毒感染的昆虫细胞高效表达人尿激酶原及其他有用蛋白质，所述方法包括：（１）构建高效表达的转移载体质粒ｐＡｃＹＴ：用限制性内切酶酶切去除质粒ｐＡｃ３７３启动子基因的ＸｈｏＩ－ＢａｍＨＩ片段（２．１Ｋｂ），得到不含启动子的ｐＡｃ３７３′ＤＮＡＸｈｏＩ－ＢａｍＨＩ大片段（７．７Ｋｂ），将３′－下游修饰过的克隆野生型ＡｃＭＮＰＶＤＮＡ多角体蛋白启动子基因片段（ＸｈｏＩ－ＢａｍＨＩ片段，２．１Ｋｂ）与７．７Ｋｂ的ｐＡｃ３７３′ＤＮＡＸｈｏＩ－ＢａｍＨＩ大片段连接，再去除一段多角体蛋白结构基因下游的ＤＮＡ片段（ＢａｍＨＩ－ＫｐｎＩ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐扬，胡美浩，张洪涛，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]