核苷酸片段的分级分离方法技术

本发明专利技术的ＤＮＡ片段的分级分离方法包括：第一步，制备各自固定了ＤＮＡ探针的探针柱或一套探针柱，ＤＮＡ探针由第一序列和第二序列组成，第一序列具有特定的已知序列和一部分酶识别序列，第二序列由邻近３′末端的第一序列的１至６个碱基的结合体组成；第二步，将ＤＮＡ低聚物连到由限制酶酶切形成的ＤＮＡ片段末端，ＤＮＡ低聚物由一部分酶识别序列和与已知序列互补的序列组成；第三步，将探针柱或一套探针柱放到含有核苷酸片段的溶液中，核苷酸片段连有第二步产生的ＤＮＡ低聚物，至少进行ＤＮＡ探针的杂交和互补链延伸，由此ＤＮＡ片段被分级分离。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核苷酸片段(DNA或RNA)的分级分离方法和该核苷酸片段的DNA序列分析方法。当不同长度的DNA处于混合状态时，例如，一条长的DNA酶切后的产物，不可能直接测定它们的DNA序列。通常有两种方法被认为是分析这样的DNA序列的方法。第一种方法包括用凝胶电泳分离各个DNA片段并且对分离的各个片段进行DNA测序。第二种方法包括将这些DNA插入到一个合适的载体中(克隆)，将这个载体导入大肠杆菌中，然后在琼脂培养基上培养，重新培养每个形成的菌落，从增殖的细菌中提取DNA用于DNA测序。用于DNA分离的凝胶电泳，可以使用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶。用凝胶电泳，可以辨别400个碱基或少于400个碱基长度的DNA中单个碱基的差别，此外，300个碱基或少于300个碱基长度的DNA可以被分离和分级分离。但是，当DNA长度较长时，凝胶分离效率可能降低。因为具有同一分级分离结果的各个DNA片段常常不能被分离，所以第一种常规方法是有问题的。此外，经过克隆的第二种常规方法也有问题，因为这种方法需要艰难的工作，太短的DNA片段不能被克隆，如果应分离所有片段对应的全部克隆，那么DNA测序可能需要大本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＤＮＡ片段的分级分离方法，包括：第一步制备各自固定了ＤＮＡ探针柱或一套探针柱，ＤＮＡ探针具有第一序列部分和第二序列部分，第一序列部分具有特定的已知序列部分和一部分酶识别序列，第二序列部分由邻近３′末端的第一序列部分的１至６个碱基的结合体组成；第二步将ＤＮＡ低聚物连接到由限制酶酶切产生的核苷酸片段的片段末端，ＤＮＡ低聚物由与已知序列部分互补的序列和一部分酶识别序列组成；第三步将探针柱或一套探针柱放到含有ＤＮＡ片段的溶液中，ＤＮＡ片段连有第二步产生的ＤＮＡ低聚物，至少进行ＤＮＡ探针的杂交和互补链延伸，由此ＤＮＡ片段被分离或分级分离。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：神原秀记，冈野和宣，植松千宗，
申请(专利权)人：株式会社日立制作所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]