抗生素WAP-8294A1、A2、A4、AX-8、AX-9和AX-13制造技术

本文公开了用一种属于溶菌（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ）属的菌株产生的抗生素ＷＡＰ－８２９４Ａ，Ａ↓［１］，Ａ↓［２］，Ａ↓［４］，ＡＸ，ＡＸ－８，ＡＸ－９和ＡＸ－１３或其药用盐；一种生产上述抗菌素ＷＡＰ－８２９４Ａ的方法，该方法包括在一培养基中培养一种属于溶菌属并具有生产抗菌素ＷＡＰ－８２９４Ａ的微生物来生产该抗生素及在该培养基中富集该抗菌素；然后回收该抗菌素等步骤；以及一种包括该抗菌素或其药用盐的抗菌组合物。这种新型的抗生素ＷＡＰ－８２９４Ａ对于由格兰氏阳性细菌，尤其是ＭＲＳＡ感染引发的感染疾病有极好的效果，因此，该抗菌素对于治疗包括ＭＲＳＡ在内的由格兰氏阳性细菌感染而引起的疾病是非常有效的。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型的作为治疗由病原微生物感染导致的疾病有用的药剂抗菌素WAP-8294A，其制备方法和它们的用途。自从用于细菌感染疾病的化学治疗剂的历史随着奎宁和洒尔佛散的合成和青霉素的发现开始以来，人类已经受惠于这些化学治疗剂了。然而，最近出现了耐这些化学治疗剂的细菌，正如由MRSA(抗2，6-二甲氧基苯青霉素金黄色葡萄球菌)所感染的疾病所代表的，对于这种疾病，化学治疗剂(除了万古霉素和去氢羟丁胺卡那霉素以外)没有效果，这就导致了医疗治疗界的混乱并构成了严重的社会问题。万古霉素作为一种抗菌素是由美国的Eli LiLLy公司开开发的，并已经被用于治疗MRSA感染的疾病。但是这样的治疗常常伴随有肾毒性，肝毒性，甚至颅神经VIII(第八脑神经)病症(耳毒性)，完成巴斯德消毒也需要很长的时间，并且怀疑会再出现耐这种抗菌素的细菌。另一方面，去氢羟丁胺卡那霉素是一种化学衍生的抗菌素，它具有作为氨基糖苷抗菌素之一的卡那毒素骨架，对于各种类型的耐药细菌有极好的抗菌作用和效果，因此它作为有限的几种治疗MRSA传染病的化学治疗试剂中的一种来使用，但是，像氨基糖苷抗菌素类特有的副作用一样，它的使用有时也会伴随有严重的肾毒性和颅神经VIII(第八脑神经)疾病(耳毒性)，因此从医学治疗的观点来看，它未必是安全的抗菌素。在这种情况下，人们一直期望着发现和开发一种新型的化学治疗试剂，它(应该)具有低的毒性，在短的时间内就能显示出其抗菌作用并且几乎没有副作用，并且为了解决这一问题人们已经做了很多研究。本专利技术的一个目的是提供一种新型的，其有抗菌活性的，满足上述要求的抗菌素。本专利技术的另一个目的是提供一种制备该抗菌素的方法。本专利技术的又一个目的是提供一种具有较低毒性或极好选择毒性的临床上有用的化学治疗剂。为了发现一种新型有用的抗菌素，本专利技术的专利技术人已经进行了各种各样的研究，结果已经成功地从泥土中分离出一种属于溶菌(lysobacter)属的菌株作为一种新型的微生物，发现该菌株产生一种文献中没有叙述过的抗菌素，从而完成了本专利技术。因此本专利技术涉及具有下文中将要详叙的物理化学性质的抗菌素WAP-8294A或其药用盐。本专利技术还涉及制备前述抗菌素WAP-8294A的方法，该方法包括下面步骤在一种培养基中培养一种属于溶菌(lysobacter)属并具有产生抗菌素WAP-8294A能力的微生物来生产该抗菌素和在培养基中富集该抗菌素；然后回收该抗菌素；本专利技术还涉及一种属于溶菌属并且具有产生抗菌素WAP-8294A能力的微生物；和一种含有至少一个选自于抗菌素WAP-8294A和其药用盐组成的一组抗菌素的抗菌组合物。附图说明图1是当抗菌素WAP-8294A通过高性能液相色谱被分离成一系列组份时观测到的色谱图。图2是抗菌素WAP-8294A2，(氢氯化物)的紫外吸收光谱(在水中)的示意图。图3是抗菌素WAP-8294A2(氢氯化物)的红外吸收光谱(FT-IR，KBr)的示意图。图4是抗菌素WAP-8294A2(氢氯化物)的1H-NMR核磁共振谱(270MHz，D2O)的示意图。图5是抗菌素WAP-8294A的酸完全水解产物的二维TLC色层谱。图6是当抗菌素WAP-2894AX通过高性能液相色谱被分离时观测到的色谱图。图7是抗菌素WAP-8294AX-8(氢氯化物)的紫外吸收光谱(在水中)的示意图。图8是抗菌素WAP-8294AX-8(氢氯化物)的红外吸收光谱(FT-IR，KBr)的示意图。图9是抗菌素WAP-8294AX-8(氢氯化物)的1H-NMR核磁共振谱(270MHz，D2O)的示意图。本专利技术涉及一种，在一种属于溶菌(lysobacter)属的新的菌株的培养基中发现的新型的抗菌素WAP-8294A。该抗菌素WAP-8294A进一步被分离成至少七种组份AX，A1，A2，A3，A4，A5和A6，且组份AX进一步被分离成至少13种组份AX-1，AX-2，AX-3，AX-4，AX-5，AX-6，AX-7，AX-8，AX-9，AX-10，AX-11，AX-12和AX-13。本文中使用的术语＂抗菌素WAP-8294A＂意思是指上述组份AX，A1，A2，A3，A4，A5，A6，AX-1，AX-2，AX-3，AX-4，AX-5，AX-6，AX-7，AX-8，AX-9，AX-10，AX-11，AX-12，AX-13或它们的混合物。除了游离形式的抗菌素WAP-8294A以外，本专利技术还包括其药用盐，例如(其)氢氯化物，硫酸盐和甲磺酸盐。这些物质对于格兰氏阳性细菌，尤其是抗2，6-二甲氧基苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)，显示出很强的抗菌活性。抗菌素WAP-8294A在C18反相硅胶-高性能液相色谱的洗脱条件下被分离成保留时间为4.0-6.1分钟，8.0分钟，11.1分钟，12.5分钟，16.5分钟，17.9分钟和18.8分钟的馏份，即组份AX，A1，A2，A3，A4，A5和A6)(见图1)。如图6所示，组份AX在C18反相硅胶-高性能液相色谱的洗脱条件下被进一步分离成保留时间为5.3分钟，5.9分钟，6.2分钟，6.5分钟，6.9分钟，7.3分钟，8.1分钟，9.3分钟，9.8分钟，11.3分钟，12.1分钟，13.7分钟和15.0分钟的馏份，即AX-1，AX-2，AX-3，AX-4，AX-5，AX-6，AX-7，AX-8，AX-9，AX-10，AX-11，AX-12和AX-13。抗菌素WAP-8294A，A1，A2和A4紫外吸收光谱(在水中)的λmax为275nm，280nm和287nm。抗菌素WAP-8294A2的紫外吸收光谱示于图2。正如其酸水解产物的分析所证实的(将在下文中详叙)，显然抗菌素WAP-8294A，A1，A2和A4在其分子中含有色氨的作为发色团。抗菌素WAP-8294A，A1，A2和A4的红外吸收光谱分析显示了它们在3300cm-1处有属于OH和NH基团的吸收，在1720-1715cm-1处有羧基或酯羰基基团的吸收；1636和1541cm-1处有属于酰胺键的吸收；和在1207及1137cm-1处有属于C-O拉伸振动的吸收，但它们均没有其他任何的特征吸收。抗菌素WAP-8294A2的红外吸收光谱示于图3。在抗菌素WAP-8294A，A1，A2和A4的1H-NMR核磁共振谱中，观测到源于甲基、亚甲基、次甲基，和杂环或芳香环的一些复杂的质子信号。抗菌素WAP-8294A2的1H-NMR谱各示于图4。WAP-8294A1，A2和A4的FAB-质谱测定表明组分A1的(M+H)+离子的m/z为1548.9，组份A2的(M+H)+离子的m/z为1562.9和组份A4的(M+H)+离子的m/z为1576.9，并且组份A1，A2和A4的钠熔融试验结果清楚地表明这些组份各为包含有碳，氢，氧和氮元素的化合物。下面表1中列出的分子式是从这些事实同时考虑结构估计和构成这些组份的所有氨基酸和脂肪酸的摩尔比(如以后详叙的)以及高分辨率FAB-质量测定结果而推断出的。表1A1A2A4FAB-质量(M+H)+1548.9 1562.91576.9FAB-质量(M-H)-1546.71561.21575.4△质量单位14质量单位14质量单位A1→A2A2→A4分子本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有下列物理化学性质的抗菌素ＷＡＰ－８２９４Ａ或其药用盐：（１）外观：白色粉末；（２）熔点：２１３－２２０℃（分解）；（３）溶解性：溶于水，甲醇，正丁醇，二甲基甲酰胺和二甲亚砜，不溶于丙酮，乙酸乙酯和氯仿；（４）颜色反应 ：在茚三酮，艾氏菌素，Ｒｙｄｏｎ－Ｓｍｉｔｈ，高锰酸钾水溶液，硫酸和碘蒸汽反应中呈阳性，并且用紫外灯发出的２５４ｎｍ的光线进行照射显示出骤熄斑；在Ｍｏｌｉｓｃｈ反应，硝酸银反应，氯化铁反应和Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ氏反应中呈阴性；（５）高 性能液相色谱的保留时间：４．０至６．１分钟，８．０分钟，１１．１分钟，１２．５分钟，１６．５分钟，１７．９分钟和１８．８分钟；（６）紫外吸收光谱（在水中）：λｍａｘ：２７５ｎｍ，２８０ｎｍ，２８７ｎｍ；（７）红外吸收光谱（ＦＴ－ ＩＲ，ＫＢｒ）：特征吸收谱：３３００ｃｍ↑［－１］，１７２０－１７１５ｃｍ↑［－１］，１６３６ｃｍ↑［－１］，１５４１ｃｍ↑［－１］，１４０４ｃｍ↑［－１］，１２０７ｃｍ↑［－１］，１１３７ｃｍ↑［－１］；（８）［１］↑Ｈ－ＮＭＲ谱（２ ７０ＭＨｚ，Ｄ↓［２］Ｏ）：观察到复杂的、源于甲基、亚甲基、次甲基、和杂环或芳环的质子信号；（９）分子量：１，４００－１，７００；（１０）有机化合物的定性试验（钠熔融法）：该抗菌素是含有碳、氢、氧和氮元素的化合物；（１１）作为茚 三酮阳性物质酸完全水解提供，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｏｒｎ，Ｎ－甲基α－氨基异戊酸，β－羟基天冬氨酸和Ｎ－甲基苯基丙氨酸；（１２）旋光率：［α］↓［Ｄ］↑［２０］＝＋４２°（Ｃ＝０．５，Ｈ↓［２］Ｏ）；（１３ ）碱性、酸性和中性分类：两性。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：大桥良民，平田晴久，中谷清吾，加藤阿斯莎，相场勇志，小久保直美，铃木信之，前田孚，
申请(专利权)人：日本医学研究公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]