血细胞生成成熟因子制造技术

一种分离的ＤＮＡ序列，包括编码至少如图１中的ＤＮＡ序列所编码的成熟多肽的ＤＮＡ或者其任一等位突变体。２．权利要求１的分离的ＤＮＡ，其中的ＤＮＡ包括图１中的至少编码图１中的成熟多肽的ＤＮＡ及其等位突变体。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新近识别的多核苷酸序列，由这些序列编码的多肽，这类多核苷酸和多肽的用途，以及这类多核苷酸和多肽的生产。更确切地说，本专利技术的多肽是一种血细胞生成因子。各种各样的生长因子已经被发现、研究和应用(Cellular and Molecular Biology，editedby the Japanese Tissue Culture Association，Asakula Shoten，1987)。这类细胞生长因子包括表皮生长因子，血小板衍生生长因子，酸性成纤维细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。基于成纤维细胞的生长促进作用，所有这些生长因子都已分离。然而，也已发现这些因子显示出广泛的活性及较低的特异性。因此，最近的努力都在寻找能特异性地作用于功能性分化细胞的生长因子。结果，一些生长因子如角质细胞生长因子和肝细胞生长因子已被分离出来，并由此产生了将这些因子用于治疗那些易受其特异性作用攻击的疾病的可能性。另一种被分离的生长因子披露于欧洲专利申请92102385.9，该项专利由Taketa Chemical Industries，Ltd.申请，它公开了一种具有加速神经胶质细胞生长活性的神经胶质激活因子，以及编码该多肽的DNA。血细胞生成作用即血细胞的产生。主要的血细胞生成组织是骨髓，脾脏，淋巴结和胸腺。在人的胚胎中，血细胞生成作用开始于生命的第二周。在第二个月里胚胎中出现骨髓，并且在妊娠的后半期以及出生后的整个生命周期中成为主要的血细胞生成器官。骨髓中含有干细胞，由它而产生所有的属于血细胞生成系列的细胞。除了T-淋巴细胞外，所有的血细胞都产生于骨髓。造血干细胞由于血细胞生成成熟因子的作用，分化成成熟的血细胞。因而，可以被纯化和分离出来的血细胞生成成熟因子，在治疗和诊断血细胞疾病或其它疾病方面将具有广泛的医用价值。根据本专利技术的一个方面，提供了一种新的多肽，即血细胞生成成熟因子，还有它的类似物和衍生物。本专利技术中的血细胞生成成熟因子是人源的。根据本专利技术的另一个方面，提供了编码这种多肽的多核苷酸(DNA或RNA)。根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种依靠重组技术生产这种多肽的方法。根据本专利技术的又一个方面，提供了一种方法将这种多肽，或编码该多肽的DNA用于治疗目的，如刺激造血或神经起源细胞的分化与繁殖。根据本专利技术的另外一个方面，还提供了一种血细胞生成成熟因子的抗体。根据本专利技术的另外一个方面，还提供了一种用作血细胞生成成熟因子拮抗剂的组合物，如在治疗T-细胞缺乏性相关疾病中可用于抑制这种多肽作用的抗这种多肽的抗体。本专利技术的这些方面及其它的方面对于本领域熟练技术人员来说，从此处的讲述中就能明白。下面的图示仅仅是作为本专利技术的特殊实施例的阐述而非任何意义上的限制。附图说明图1示出编码血细胞生成成熟因子多肽的多核苷酸序列。同时示出血细胞生成成熟因子多肽的氨基酸序列。使用标准的三字母缩写方式说明氨基酸序列。图2示出血细胞生成成熟因子与神经胶质成熟因子β间的同源性。图3说明了经细菌表达以及纯化后的纯的血细胞生成成熟因子蛋白的带型特征。图4是Northern杂交分析，指出血细胞生成成熟因子主要发现于人体的哪些器官。图5说明了Hela细胞的生长被血细胞生成成熟因子的存在所抑制。根据本专利技术的一个方面，提供了如图1所示的DNA序列(以及相应的RNA序列)和/或编码与图2中所示序列相同的多肽的DNA(RNA)序列，以及它们的片段，衍生物，类似物及所有的等位突变体。根据本专利技术的另一方面，提供了编码与于1993年8月4日保藏的、ATCC保藏号为75514的cDNA克隆所编码的多肽相同的多肽的多核苷酸，和/或这种多核苷酸的片段，类似物，衍生物及等位突变体。对于DNA，该DNA可能是单链或双链形式。若是单链形式，该DNA序列可能是如图1所示的“有意义”的链或者是其互补链。该多核苷酸(DNA或RNA，最好是DNA)至少包括编码该多肽的部分，其编码部分可能与保藏的克隆相同也可能不同，由此可编码相同的多肽或者是它的等位突变体。该编码部分最好至少要能编码成熟形式的本专利技术的多肽。本专利技术还涉及与上述多核苷酸序列杂交的多核苷酸序列，如果在两个序列之间至少有50％、最好是至少70％的同一性。在另一个优选的实施方案中，本专利技术涉及在严格条件下与上述的多核苷酸杂交的多核苷酸序列。用于此处的术语“严格条件”意味着在两个序列之间至少95％，最好是至少97％的同一性时，杂交才能发生。因此，本专利技术包括图1所示的DNA所编码的多肽的等位突变体的编码DNA(RNA)序列。由此，本专利技术提供了分离形式的DNA(RNA)，该DNA(RNA)编码天然产生的一种人类多肽即血细胞生成成熟因子，还有它的等位突变体。本专利技术还涉及一种多肽即血细胞生成成熟因子，它具有图2所示的结构，还有其等位突变体，以及其类似物，片段及衍生物，这些都具有与天然产生的多肽相同的功能。本专利技术的多肽主要在血细胞生成组织中表达，而且本身作为血细胞生成成熟因子控制着血细胞生成作用的起始以及那些与之相互作用的细胞。本专利技术还涉及1993年8月4日保藏的，ATCC保藏号为75514的克隆中的DNA所编码的一种多肽，以及它的类似物，片段，衍生物及等位突变体。保藏是按国际承认的用于专利目的的微生物保藏布达佩斯条约进行的。这种保藏仅仅是提供一种方便而非按35 U.S.C.S 112要求保藏物的一种许可。从保藏材料中获得的多核苷酸序列，以及由该多核苷酸序列编码的多肽的氨基酸序列，在此一并作为参考并且在万一与在此所描述的序列有冲突时作为对照。制造，使用或销售保藏的材料要求得到许可，而这种许可并未被授予。本专利技术的多肽优选的是以一种分离形式以及纯品的形式提供。术语“分离的”指的是材料离开了它的原始环境(例如天然环境，若它是天然产生的)。例如，存在于活的动物中的天然产生的多核苷酸或多肽不是分离的，但同样的多核苷酸或多肽，若将其与在天然系统中与其共存的一些或所有材料分开，则就是分离的。这样的多核苷酸可以是一个载体的一部分，而且/或者这样的多核苷酸或多肽可能是一种组合物的一部分，如果这些载体或组合物不是它的天然环境的一部分，则它仍是分离的。在一个优选的实施方案中，血细胞生成成熟因子是全长形式的成熟的人类血细胞生成成熟因子或是它的等位突变体或糖基化了的突变体。该多核苷酸还可能是编码一个前体蛋白，然后该前体在哺乳动物细胞中加工，再以成熟的蛋白质的形式分泌出来。本专利技术的多核苷酸能编码一种成熟形式的多肽或是还编码一段引导序列以方便该多肽的分泌。例如，所要DNA序列能在同一个读框中与一段能帮助多肽分泌的DNA序列融合，如一段引导序列，它的功能就是作为分泌序列控制多肽从宿主细胞往外的运输。具有引导序列的蛋白质即为前体蛋白质，而且引导序列能被宿主细胞切除，形成成熟形式的蛋白质。本专利技术的多核苷酸还能在同一个读框中融合一个标记序列，例如一个组氨酸标记，它有助于多肽的纯化。由此，本专利技术的多肽可能是成熟形式的本专利技术的血细胞生成成熟因子；或者是前体蛋白或前体多肽的形式，即成熟形式的多肽加上一段引导序列或分泌序列；或者可能是融合蛋白的形式，即在成熟的或前体蛋白的3′或5′端融合一段附加的氨基酸，它将有助于多肽的纯化处理。在本专利技术的一个优选实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：厄文·科克尼斯，马克·D·亚当斯，亨里克·奥尔森，克雷格·罗森，
申请(专利权)人：人体基因组科学有限公司，
类型：发明
国别省市：