微生物方法技术

本发明专利技术提供了一种用于将苯基烷基酮立体有择还原成其相应的（Ｓ）－羟基化合物的方法。此方法是利用新的微杆菌（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｕｍ）ＭＢ５６１４来实现这种手性还原作用的，本发明专利技术还提供了这种新的微生物，它已保藏于ＡＴＣＣ，保藏号为ＡＴＣＣ５５５５７。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
专利技术背景白三烯(leukotriene)构成一组由生命系统中花生四烯酸产生的，在局部起作用的激素。主要的白三烯是白三烯B4(缩写为LTB4)，LTC4，LTD4和LTE4。这些白三烯的生物合成，是从5-脂肪氧合酶对花生四烯酸作用生成被称为白三烯A4(LTA4)的环氧化物开始，然后再通过后续的酶促反应步骤，转变成其它的白三烯。有关白三烯生物合成及其代谢的进一步详情，可参阅《白三烯和脂肪氧合酶》(J.Rokach编辑，Elsevier，阿姆斯特丹(1989))。在Rokach的这本书中，还论述了白三烯在生命系统中的作用和它们与各种病症的关系。在美国专利5,270,324中，报导了一种喹啉类型的白三烯拮抗剂，其中的一组是具有式(I)结构的化合物 其中Ra、Rb特别是氢或卤素；Rc可能是CO2Rd，CORd或C(Re)2-OH；Rd可能是氢或低级烷基，Re也可能是低级烷基；而ALK是例如环丙基-1，1-(双)亚甲基，异丙基等等。在欧洲已公开申请604114中，这种白三烯拮抗剂被进一步公开，其中的一组是具有式(II)结构的化合物 其中的Ra、Rb、Rc和ALK是如上所述的基团。以下式(III)的(S)-羟基化合物，是合成式(I)和(II)化合物过程中的中间体。式(III)结构的化合物可以通过使用手性还原剂如二异蒎莰氯甲硼烷，从相应的具有如下式(IV)结构的酮来制备。手性化学还原作用通常需要使用昂贵的手性还原剂；因此，有必要寻找另一种比化学方法更经济和/或更方便的方法来制备式(III)结构的手性化合物。更具体地说，本专利技术提供了一种制备式(III)化合物的方法， 它包括使式(IV)的化合物与具有ATCC55557鉴定特征的微杆菌MB5614，或者其突变体或变异体相接触； 其中A是-CH＝CH-S-或-CH＝CH-CH＝CH-；R1和R2独立地是氢或卤素；R3是CO2R6，COR6或C(R7)2-O-R8；R6是氢或低级烷基，R7是低级烷基，R8是氢或羟基保护基。在一个优选的实施方案中，A是-CH＝CH-CH＝CH-，R1和R2中的一个是氢，另一个是卤素，R3是CO2R6。在一个更优选的实施方案中，A是-CH＝CH-CH＝CH-，R1和R2中的一个是氢，另一个是氯，R3是CO2CH3。本专利技术的另一方面，是提供了具有ATCC 55557鉴定特征的微杆菌MB5614，或者其突变体或变异体的生物学纯培养物。缩写和定义在本申请中，除非另有特殊说明，下列缩写和定义都是适用的。FAB-MS＝快速原子轰击质谱测定法HPLC＝高压液相色谱法MES＝N-吗啉代乙烷磺酸MSG＝谷氨酸单钠NMR＝核磁共振法TLC＝薄层色谱法UVC＝紫外线“烷基”包括直链、分枝和环状结构及其组合。“低级烷基”意指1-7个碳原子的烷基。低级烷基包括例如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲-和叔-丁基，戊基，己基，庚基，环丙基，环丁基，环戊基甲基，环己基，等等。“卤素”包括氟，氯，溴和碘。“羟基保护基”可以是例如醚，如甲氧基甲基，四氢吡喃基，乙氧基乙基，三氯乙基，叔丁基，烯丙基，苄基，三甲基甲硅烷基乙基，二苯基甲基，和三苯基甲基；也可能是甲硅烷基醚，如三甲基甲硅烷基，二甲基异丙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基；还可能是酯，如甲酰基，三氯乙酰基，苯甲酰基和三氟乙酰基；还可能是碳酸酯，如三氯乙基，苄基和烯丙基。其他适合的羟保护基可以在标准参考文献中找到，比如《有机合成中的保护基》Green和Wuts编辑，1991，John Wiley & Sons公司，纽约。应用式(III)的化合物是制备式(I)和(II)的白三烯拮抗剂的中间体；用这种中间体制备这些白三烯拮抗剂的方法已在如下专利中公开了美国专利5,270,324和欧洲已公开申请604114，以及正在共同申请中的美国申请序列号08/174,931。式(I)和(II)的化合物可用作抗气喘剂，抗过敏反应剂，抗炎症剂和细胞保护性治疗剂。基质(substrate)的制备在本专利技术用于酮的微生物手性还原方法中，微杆菌的基质、式(IV)的化合物，可按照本专业人员熟悉的方法制备。制备其中A是-CH＝CH-CH＝CH-的式(IV)化合物的方法，在美国专利5,270,324中公开了；制备其中A是-S-CH＝CH-的式(IV)化合物的方法，在欧洲已公开申请604114中公开了。微生物描述微杆菌MB5614是从土壤样品中分离出的，此土壤样品取自一个公园(圣罗萨纪念公园，Guanacaste Pr.，哥斯达黎加)的场地。在采样之前，此场地已经过48小时焚烧。该培养物的样品已据布达佩斯协议，以如下形式保存美国典型培养物保藏中心，Rockville，MD，保藏号ATCC55557，以及Merck微生物资源培养物保藏中心，Rahway，NJ，保藏号MB 5614。在下列文献中，对这种微生物进行了如下的分析研究生长和一般培养特征的观察Cure和Keddie，1969，需氧杆菌的形态学测定方法，Board和Lovelock(编辑)环境的取样和微生物监测，学术出版社，伦敦，pp.123-135。碳源利用的研究Kamagata和Suzuki，1986，Sneath，P.H，N.S.Mair，M.F.Sharpe，和J.G Holt(编辑)伯杰氏系统细菌学手册V.II.pp.1314。其它生理学测定Jones，1975，杆形菌及其相关菌的数字分类学研究，普通微生物学杂志，8752～96。用如下所述方法进行的细胞壁分析Lechevalier和Lechevalier，1980，放线菌纲的化学分类学，Dietz，A.和D.W.Thayer(编辑)放线菌分类学。工业微生物学协会，Arlington，VA.pp.225-291，以及Uchida和Aida，1984，一种改进的用于酰基型细菌细胞壁简易鉴定的甘醇酸酯测定法，普通及应用微生物学杂志，30131-134。用如下方法进行的甲基萘醌分析Hiraishi等，1992，用二维薄层色谱法对细菌醌的快速检测，应用微生物学通讯14170-173。用如下方法进行的脂肪酸分析Miller和Berger，1985，惠普应用简讯，pp.228-241，惠普公司，Palo Alto.CA。细胞形态学。非运动的，革兰氏阳性，棒状的多形性杆菌(1.14×0.38μm)。在生长周期中发生初级分枝，但不产生菌丝体。不存在明显的杆状-球状生长周期。不产生内生孢子。培养和生理学特征。嗜温性的，在28℃和37℃下生长。耐热性好，60℃加热30分钟后的仍然存活。严格需氧菌，过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性。虽然也可以进行发酵代谢，但主要是呼吸代谢。从下列碳水化合物代谢产酸纤维二糖，果糖，半乳糖，D-葡萄糖，甘油，甘露糖，麦芽糖，D-核糖，蔗糖，海藻糖，和D-木糖，不能从下列碳水化合物代谢产酸阿拉伯糖，肌醇，乳糖，蜜二糖，D-棉子糖，鼠李糖，可溶性淀粉，D-山梨醇，L-山梨糖，或L-木糖。对明胶有微弱的水解液化作用，但不水解壳多糖，淀粉，酪蛋白，尿素，或纤维素。复合性营养，能在蛋白胨基本培养基中生长。生长还可能需要B-复合维生素和氨基酸。在蛋白胨基本培养基上，菌落直径1-3mm，黄色，透明，隆起，并具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备式（Ⅲ）化合物的方法，＊＊＊ （Ⅲ）它包括：使式（Ⅳ）的化合物与具有ＡＴＣＣ ５５５５７鉴定特征的微杆菌ＭＢ５６１４，或者其突变体或变异体相接触：＊＊＊ （Ⅳ）其中Ａ是－ＣＨ＝ＣＨ－Ｓ－或－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ －ＣＨ－；Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］独立地是氢或卤素；Ｒ↑［３］是ＣＯ↓［２］Ｒ↑［６］，ＣＯＲ↑［６］或Ｃ（Ｒ↑［７］）↓［２］－Ｏ－Ｒ↑［８］；Ｒ↑［６］是氢或低级烷基；Ｒ↑［７］是低级烷基；Ｒ↑［８］是氢或羟基保护基。

【技术特征摘要】
US 1994-7-20 08/277,7281.一种制备式(III)化合物的方法， 它包括使式(IV)的化合物与微杆菌MB5614ATCC55557或者具有酮还原能力的其突变体或变异体相接触 其中A是-CH＝CH-S-或-CH＝CH-CH＝CH-；R1和R2独立地是氢或卤素；R3是CO2R6，COR6或C(R7)2-O-R8；R6是氢或低级烷基；R7是低级烷基；R8是氢或羟基保护基。2.权利要求1的方法，其中A是-CH＝CH-CH＝CH-，R1和R2中的一个是氢，另一个是卤素，而R3是CO2R...

【专利技术属性】
技术研发人员：MM沙特雷恩，陈世上，GM加里蒂，B亨布殊，C勒贝格，A沙菲，
申请(专利权)人：麦克公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]