调节剂测定制造技术

已经证明某些化合物结合TNF并稳定与TNF受体结合的三聚体TNF的构象。因此，这些化合物可以用作TNF的调节剂。还公开了用这种作用机制鉴定化合物的新测定法。

Determination of modifier

It has been shown that some compounds bind to TNF and stabilize the conformation of the tripolymer TNF binding to the TNF receptor. Therefore, these compounds can be used as a regulator of TNF. A new method for the identification of compounds by this mechanism is also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节剂测定专利
本专利技术涉及TNF超家族的调节剂。具体而言，本专利技术涉及TNF超家族的新型小分子调节剂。本专利技术还涉及用于鉴定TNF超家族的新调节剂的测定法。
技术介绍
肿瘤坏死因子(TNF)超家族是共有调节细胞存活和细胞死亡的主要功能的蛋白质家族。TNF超家族的成员共有共同的核心基序，其由两个反平行的β折叠片(具有反平行的β链)组成，形成“果冻卷(jellyroll)”β结构。TNF超家族成员共有的另一个共同特征是形成同源或异源三聚体复合物。TNF超家族成员的这些三聚体形式结合并激活特定的TNF超家族受体。TNFα是TNF超家族的原型成员。TNFα生产的失调牵涉到许多具有重大医学重要性的病理状况。例如，TNFα牵涉到类风湿性关节炎、炎性肠病(包括克罗恩氏病)、牛皮癣、阿尔茨海默氏病(AD)、帕金森病(PD)、疼痛、癫痫、骨质疏松症、哮喘、系统性红斑狼疮(SLE)和多发性硬化症(MS)。TNF超家族的其他成员也牵涉到病理状况，包括自身免疫性疾病。TNF超家族成员的常规拮抗剂是大分子的并且通过抑制TNF超家族成员与其受体的结合起作用。常规拮抗剂的实例包括抗-TNFα抗体，特别是单本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物的方法，由此化合物‑三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节所述受体的信号传导，所述方法包括：a)鉴定所述化合物与样品中三聚体形式的TNF超家族成员的结合；和/或b)测量包含所述化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性；和/或c)测量包含所述化合物的样品中结合至必需受体的三聚体TNF超家族成员的水平；和/或d)测量化合物与探针化合物对结合三聚体形式的TNF超家族成员的竞争性；以及将(a)中所述化合物与三聚体形式的TNF超家族成员的结合和/或(b)中三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性和/或(c)中结合至必需受体的三聚体TNF超家...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.18 GB 1510758.41.一种鉴定能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物的方法，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节所述受体的信号传导，所述方法包括：a)鉴定所述化合物与样品中三聚体形式的TNF超家族成员的结合；和/或b)测量包含所述化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性；和/或c)测量包含所述化合物的样品中结合至必需受体的三聚体TNF超家族成员的水平；和/或d)测量化合物与探针化合物对结合三聚体形式的TNF超家族成员的竞争性；以及将(a)中所述化合物与三聚体形式的TNF超家族成员的结合和/或(b)中三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性和/或(c)中结合至必需受体的三聚体TNF超家族成员的水平，和/或(d)中观察到的竞争水平与对照样品的相应值相比较，并选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。2.权利要求1的方法，其包括：a)对含有TNF超家族成员和所述化合物的样品进行质谱分析，以检测TNF超家族成员三聚体的量；b)与对照样品比较样品中TNF超家族成员三聚体的量；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。3.权利要求1的方法，其包括：a)进行受体-配体结合测定，其中将TNF超家族成员和化合物的样品施加至已结合至表面的必需TNF受体；b)与对照样品比较与必需TNF受体结合的TNF超家族成员三聚体的量；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。4.权利要求1的方法，其包括：a)进行测定以确定TNF超家族成员和化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的Tm；b)与对照样品比较样品中三聚体形式的TNF超家族成员的Tm；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。5.权利要求1的方法，其包括：a)使用所述化合物和探针化合物进行荧光偏振测定；b)将所述探针化合物在所述化合物存在下的偏振度与对照样品中的偏振度进行比较；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。6.权利要求1至5中任一项的方法，其中含有TNF超家族成员和所述化合物的样品进一步包含去稳定剂。7.权利要求6的方法，其中所述去稳定剂是DMSO。8.权利要求1的方法，其包括：a)进行等温量热分析以测量在所述化合物存在下TNF超家族成员对必需受体的结合；b)与对照样品比较TNF超家族成员对必需受体的结合；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。9.权利要求1的方法，其中步骤(c)包括测量包含所述化合物的样品中的三聚体TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。10.权利要求1或9的方法，其包括：a)进行测定以确定TNF超家族成员和所述化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的KD-r；b)与对照样品比较样品中三聚体形式的TNF超家族成员的KD-r；和c)选择能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白的化合物，由此化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节受体的信号传导。11.前述权利要求中任一项的方法，其中与不存在所述化合物的情况下三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性相比，所述化合物增加所述三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性。12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的热转换中点(Tm)增加至少1℃。13.权利要求12的方法，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的热转换中点(Tm)增加至少10℃。14.权利要求13的方法，其中所述三聚体形式的TNF超家族成员的Tm的增加为10℃至20℃。15.前述权利要求中任一项的方法，其中与不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体的结合亲和力相比，所述化合物增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。16.权利要求15的方法或化合物，其中所述化合物通过相较于在不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体结合的缔合速率(kon-r)和解离速率(koff-r)值增加缔合速率(kon-r)和/或降低解离速率(koff-r)来增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。17.权利要求15的方法，其中所述化合物通过相较于在不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体结合的缔合速率(kon-r)值增加缔合速率(kon-r)来增加所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·P·奥康奈尔，J·R·波特，A·劳森，B·克罗普里恩，S·E·拉佩奇，T·J·诺曼，G·J·瓦里洛，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE