新的抗艾滋病免疫毒素制造技术

一种组合物，它包含一种免疫毒素，所述的免疫毒素包含与抗ＨＩＶ病毒逆转录酶的单克隆抗体化学结合的毒素。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
专利
本专利技术主要涉及分子免疫学和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的治疗方法。具体地说，本专利技术涉及用于治疗艾滋病的新的免疫毒素。相关技术的说明全世界有六百万人感染了HIV病毒，因而迫切需要治疗这种疾病的有效方法。虽然人们正致力于研究疫苗的开发，但是病毒的特殊性质使得这种研究成为一项尤其艰难而持久的任务。而且，对目前的AIDS病例的治疗受到严重的限制。在美国，目前只有一种药物，即迭氮胸苷(AZT)已经注册可正式使用。但问题是不断有抗AZT的HIV毒株产生。随着病毒突变形式的出现，抗性不断提高。目前盛行的有关病毒抗药性的理论认为是病毒的变异速度之快使得抗性更高的变异形式以极快的速度出现。但是，最近的研究提出，抗药性并不是高突变性的结果，而可能是病毒高水平复制的结果。不论抗药性的机制如何，AZT不会长期有效。而且，这种治疗方法十分昂贵，并伴有副作用，例如恶心、癫痫发作、肝功能紊乱和骨髓抑制。AZT的其它化学变体，例如DDC和DDI，虽然在临床试验中具有治疗前景但是药效有限。虽然目前正在进行大量其它药物和治疗方案的研究，但是显然需要别种药物和新的方法来治疗这种疾病。实验性的AIDS免疫疗法显示出一定的前景，但是多数疗效十分不稳定，这主要是因为靶分子的高度变异性。这些靶分子，例如HIV囊膜蛋白，在不同毒株和不同病人中都不相同。但是，在抗体-毒素结合物的抗体部分有完全特异的靶存在时，免疫毒素疗法被证明对几种其他疾病十分有效。例如，可将假单胞菌外毒素与抗卵巢癌肿瘤的单克隆抗体偶联。在小鼠模型中，它有效地抑制了人卵巢癌细胞的生长(Willingham，M.C.等，1987)。AIDS免疫疗法所需要的是高度特异性的不变的靶。HIV酶即逆转录酶(RT)对病毒复制来说十分重要。这种酶在催化病毒遗传物质(RNA)的DNA拷贝形成中起主要作用。DNA然后被用于立即产生更多的病毒拷贝，或整合进病人的基因组，在以后表达病状。很可能是这种重要的作用导致了逆转录酶高度保守的结构。而且，最近证明，当细胞被HIV感染后，逆转录酶(或其部分)的拷贝与细胞的外表面结合。逆转录酶在细胞表面的表达甚至大大超过病毒囊膜蛋白的表达。现有技术中缺少一种治疗获得性免疫缺陷综合征的有效手段。本专利技术填补了该领域长期以来的这项空白。专利技术综述本专利技术实施方式之一提供了一种包含免疫毒素的组合物，其中所述的免疫毒素包含与抗病毒逆转录酶的单克隆抗体化学结合的毒素。本专利技术实施方式之二提供了一种包含免疫毒素和药学上认可的载体的药物组合物，其中所述的免疫毒素包含与抗病毒逆转录酶的单克隆抗体化学结合的毒素。本专利技术实施方式之三提供了一种治疗获得性免疫缺陷综合征的方法，其步骤包括给患有所述综合征的病人使用治疗有效量的本专利技术的新型组合物。本专利技术实施方式之四提供了治疗被人免疫缺陷病毒感染的个体的方法，其步骤包括给所述个体使用治疗有效量的本专利技术的新型组合物。为了本专利技术的公开给出以下优选实施例，本专利技术其它方面的内容、特点和优点将由此变得显而易见。 附图说明为了获得和充分理解本专利技术的上述特点、优点和目的等，将参照附图中表示的特定实施例对以上简要说明的本专利技术进行具体的说明。这些附图是本说明书的一部分。但需要指出的是，由于附图说明的是本专利技术的优选实施例，所以不能被认为是对本专利技术范围的限定。附图1表示免疫毒素合成的总方案图(图1A，1R，1C和1D)。图2表示抗感染H9细胞的HIV毒株(HIV-AC-1)的免疫毒素即逆转录酶单克隆抗体-商陆(Podeweed)抗病毒蛋白对细胞作用24小时或48小时。图3表示免疫毒素即抗逆转录酶单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白对HIV细胞系H-9和HIV毒株PM-213作用24、48或72小时后的效果。图4表示培养1天之后本专利技术的免疫毒素构建物即抗逆转录酶单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白其细胞毒性的剂量效应关系。图5表示本专利技术的抗逆转录酶单克隆抗体-gelonin免疫毒素其细胞毒性的剂量效应关系。图6表示免疫毒素抗逆转录酶单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白对H9细胞+HIV-IIIB的作用。图7表示用本专利技术的免疫毒素的抗逆转录酶单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白处理H9+MN细胞3天后的效果。图8表示培养1天后本专利技术的gelonin免疫毒素对H9细胞+HIV-MN的作用。图9表示本专利技术的gelonin免疫毒素对H9细胞+HIV-MN的作用。本专利技术的详细说明本专利技术公开了一种利用免疫毒素治疗获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的新方法。治疗途径的设计以释放极为有效的对AIDS病毒感染细胞具特异性的毒素为基础，这种特异性是通过利用抗病毒逆转录酶的单克隆抗体来使之以被感染细胞为目标而获得的。大多数HIV感染细胞在细胞表面表达病毒逆转录酶。而且，不同毒株和不同分离物的HIV逆转录酶之间的结构差异很小。这与大多数具高度变异性的HIV病毒蛋白不同。本专利技术公开了利用抗HIV-1逆转录酶的不同单克隆抗体和多种单链和双链的催化性核糖体灭活的毒素制备的免疫毒素，这些毒素包括商陆抗病毒蛋白、gelonin、蓖麻毒蛋白A链、modeccin和dodecandrin。免疫毒素的效果与抗体和毒素均相关。决定细胞结合、内化作用、由细胞表面向内部转运和总的细胞毒性的因素是复杂而难以预计的。所以，很难确定将哪一种单克隆抗体与特定的毒素结合。本专利技术确定了MAb-PAP(商陆抗病毒蛋白)和MAb-Gelonin免疫结合物的理想的量效曲线。这些量效曲线有助于与其它类型的免疫结合物制剂进行比较。本专利技术还公开了免疫结合物的制备方法，利用相同的单克隆抗体，但包含毒素蓖麻毒蛋白、蓖麻毒蛋白A链和dodecandrin，因为它们具有抗HIV感染细胞的细胞毒性。本专利技术还公开了抗HIV-1-逆转录酶的其他单克隆抗体。然后，这些单克隆抗体分别与PAP(商陆抗病毒蛋白)、gelonin、麻麻毒蛋白、蓖麻毒蛋白A链或dodecandrin偶联，然后测定细胞毒性。本专利技术描述了一种包含免疫毒素的组合物，所述的免疫毒素包含与抗病毒逆转录酶的单克隆抗体化学结合的毒素。制备了一组共70多种抗HIV-1逆转录酶的鼠单克隆抗体。它们在IgG和IgM种类和亚型上有所不同。HIV逆转录酶特异性单克隆抗体的代表性实例包括HIVRT10-1-a，HIVRT2-2-F8，HIVRT11-1-b，HIVRT6-1-a，HIVRT12-1-c，HIVRT6-9，HIVRT15-3，HIVRT16-4，HIVRT14-1-d，HIVRT18-1，HIVRT2-3-b，HIVRT10-1-b和HIVRT10-4。本专利技术还提供了一种治疗获得性免疫缺陷综合征的方法，包括给患有所述综合征的病人使用治疗有效量的权利要求4所述的组合物步骤。而且，本专利技术提供了治疗感染了人免疫缺陷病毒的个体的方法，包括给所述个体使用治疗有效量的本专利技术组合物的步骤。本专利技术特别考虑可以利用本专利技术新的免疫毒素来制备药物组合物。此时，药物组合物包含本专利技术新的免疫毒素和药学上认可的载体。本领域的一般技术人员无需过多实验即可方便地确定给予本专利技术的不同免疫毒素的合适剂量和途径。本专利技术还提供了包含本专利技术新免疫毒素和药学上认可的载体的药物组合物。本专利技术的药物组合物适用于各种药物释放系统。有关目前药物释放方法的简要本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：G·B·基托，
申请(专利权)人：研究发展基金会，
类型：发明
国别省市：