胶霉毒素衍生物及由它制成的抗癌药制造技术

＊＊＊ （Ⅰ） 本发明专利技术涉及以乙酰胶霉素和用下述通式（Ⅰ）表示的胶霉毒素衍生物作为有效成分的抗癌药。这些胶霉毒素化合物对于以往药效不理想的固型癌有着优异的效果。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对肿瘤增殖有抑制活性的胶霉毒素衍生物，以及以其作为有效成分的抗癌药。
技术介绍
至今为止用于固型癌的抗癌药已被开发出许多种，但是较满意的抗癌药还没被开发出来。现在临床应用较多的抗癌药(阿霉素、顺铂、5-FU、喜树碱(kanptotecin)等)，对白血病细胞等增殖良好的肿瘤有效，但是对于在临床上有必要给予抗癌药的、增殖性恶劣的固型癌，这些现有的抗癌药不能充分发挥药效。这种情况就是现有的抗癌药在实际治疗中不能充分发挥药效的理由之一。本专利技术的主题是提供对固型癌有非增殖依赖的细胞毒性、同时有细胞凋亡诱导活性的有效的抗癌药。专利技术的公开本专利技术者们为了达到上述目的进行了深入的研究，发现了霉菌(Dichotomomyces cejpii)的培养液有强烈的非增殖依赖的细胞毒性以及细胞凋亡诱导活性的事实。因此将其中的成分分离、确证后，是乙酰胶霉毒素。乙酰胶霉毒素有下述的通式。 在此对乙酰胶霉毒素的生理活性进行了研究，发现其有如下作用(1)有不依赖于细胞增殖的细胞毒性；(2)作为抗癌药有对使癌消退所必须具有的细胞凋亡(Apoptosis)诱导活性；(3)使用在临床上切除的肿瘤细胞进行三次培养(三次元培養)仍然显示出很好的细胞毒性；(4)并且对于体内评价试验来说，在较宽的剂量范围，对于移植的固型癌(人固型癌、小鼠固型癌)显示出显著的增殖抑制活性。上述的乙酰胶霉毒素是已经被J.R.Johnson(J.Amer.Chem.Soc.,75,2110-2112(1953))等人报导过的已知的化合物。可是乙酰胶霉毒素具有抗癌效果却是至今还不被知道的事情。并且，大量生产乙酰胶霉毒素的方法也是未知的。根据以上的发现，本专利技术者们由乙酰胶霉毒素合成了各种的化合物，研究了其抗癌活性。结果，是发现了用下述通式表示的胶霉毒素衍生物，也对固型癌显示出高的抗癌活性。 上述通式的化合物中X是羟基的化合物是已知化合物(J.Chem.Suc.(c),1799(1966))，其他的是新的化合物。这些化合物有抗癌活性是至今还不知道的。即本专利技术是提供以含有乙酰胶霉毒素以及用上述通式表示的胶霉毒素衍生物作为有效成分作为特征的抗癌药。附图的简单说明附图说明图1表示本专利技术得到的乙酰胶霉毒素的1H核磁共振图谱。图2表示本专利技术得到的乙酰胶霉毒素的13C核磁共振图谱。图3是表示将在本专利技术的实施例得到的乙酰胶霉毒素给予大肠癌小鼠，对肿瘤重量的经时变化测定结果的图表。图4是表示将在本专利技术的实施例得到的乙酰胶霉毒素给予大肠癌小鼠，对IR的经时变化测定结果的图表。图5是表示将在本专利技术的实施例得到的乙酰胶霉毒素给予大肠癌小鼠，对尸体重量的经时变化测定结果的图表。实施专利技术的最佳方式本专利技术的胶霉毒素衍生物能够从乙酰胶霉毒素合成，乙酰胶霉毒素可以通过培养有产生它的能力的微生物而大量生产。作为具有产生乙酰胶霉毒素能力的微生物的例子来说，可以举出Dichotomomyces cejpii AJ117330(FERM BP-5738)。这个微生物是从在神奈川县川崎市采集到的土壤中照下面的方法采取得到的。将这种土壤1g在55℃条件下进行湿热处理10分钟后通过稀释平板法，涂布在玉米粉琼脂培养基(添加抗生素，氯霉素50mg/L，玫瑰红15mg/L)的一面上。在25℃条件下培养5天，从出现的菌落中分离出本专利技术的菌株。以下记载了由这种方法分离出的AJ117330(FERM BP-5738)菌株的细菌学的性质。(a)在各种培养基中的生长形态在麦芽提取物琼脂培养基上的生长良好，25℃、7天时菌落直径是52mm。菌落表面呈白色绒毛状，内部呈淡黄色。未发现在培养基中有色素、油滴生成。菌丝是松散的羊毛状，整个地形成闭囊壳。在马铃薯·葡萄糖琼脂培养基上的生长良好，25℃、7天时菌落直径是58mm。菌落表面呈白色绒毛状，内部呈淡黄色。未发现在培养基中有色素、油滴生成。菌丝是松散的羊毛状，整个地形成闭囊壳。在玉米粉琼脂培养基上的生长良好，25℃、7天时菌落直径是47mm。菌落表面呈白色绒毛状、周边薄，内部呈白色。未发现在培养基中有色素、油滴生成。形成闭囊壳。(b)形态的特征分散在培养基表面的闭囊壳，被球形-似球形、直径0.3～1mm、无色的菌丝松散地包裹。包裹于子囊果中的子囊是无色、含有着8孢子、为球形-似球形、直径8～12μm。子囊胞子是无色，从正面来看是球形、从侧面来看是透镜形、有2个赤道缘。大小约4μm(不包括赤道缘)。分生孢子世代由粉状分生孢子(aleurioconidium)组成。分叉方式是不规则的，但通常是二叉状。分生孢子是卵型、大小是(6-10)×(5-8)μm。生长温度是10～40℃，优选生长温度是25～35℃。生长pH是3～10，优选pH是5～7。从以上细菌学方面的性质，本菌根据(1978，讲谈社(日本)，宇田川 俊一，椿启介等6人著)鉴定为子囊菌亚门，不整子囊菌亚纲、Dichotomomyces cejpii。本菌株于平成8年11月6日由通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(日本国茨城县Tsukuba市东1丁目1番3号)依据布达佩斯条约进行了国际保藏，给予了FERM BP-5738的保藏编号。培养属于Dichotomomyces属的，有生产乙酰胶霉毒素能力的微生物的培养基，可以是能够培养霉菌的物质，如果是含有碳源、氮源、无机盐类、有机营养物等的物质，固体培养基、液体培养基都能够使用。作为培养基的成分，蔬菜汁液是较好的选择，优选添加到50g/L～200g/L范围。培养可以在10～40℃、优选25～35℃,5～14天之间，通常是5～10天之间有氧的条件下进行。对于从培养物中提取乙酰胶霉毒素来说，作为预处理的方法，最好是加丙酮、甲醇、乙醇等亲水性有机溶剂，提取出残存在菌体内的乙酰胶霉毒素。添加量对于培养物的体积比为以1/4～1/1的比例较好。这个添加量，对于培养物是将培养液预先通过减压浓缩等进行浓缩处理之后的情况，即是指浓缩物。对于菌体内残存量较少的情况，没有必要进行这样的处理。从培养物中回收乙酰胶霉毒素的方法有溶剂提取和吸附分离。对于溶剂提取法，在培养物中加入能够溶解乙酰胶霉毒素的有机溶媒。这个添加量对于培养物的体积比是1/4～1/1左右，通常在1/2～1/1左右的比例较好。对于有机溶媒来说，可以使用丙酮、C1-C4范围的低级醇、二甲基亚砜等和水混合的溶媒，也可以使用氯仿、醋酸乙酯、甲苯等和水分层的溶媒。对于使用了和水混合的有机溶媒的情况，用将菌体等的混悬物离心、过滤等方法分离；对于使用了和水分层的溶媒的情况，分离水层，收集上清液或者有机溶剂层进行精制。对于吸附分离的情况，将合成吸附剂(例如Diaion HP20,Sepabeads SP207(三菱化学))等的吸附剂与培养液接触，将乙酰胶霉毒素吸附，回收。精制可以采用通过硅胶柱吸附分离、液相色谱法、溶剂提取等方法的合理组合来进行。本专利技术的胶霉毒素衍生物，是用上述通式(Ⅰ)表示的化合物，在这里，X是氢原子、羟基、碳原子数1-3的烷氧基、或者碳原子数2-3的酰氧基。作为上述碳原子数1-3的烷氧基来说，可以举出甲氧基、乙氧基、丙氧基。再有作为碳原子数2-3的酰氧基来说，可以举出乙酰基、丙酰基。作为用通式(Ⅰ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗癌药，其特征在于含有通式（Ⅰ）表示的胶霉毒素衍生物作为有效成分，＊＊＊ （Ⅰ）上述通式中，Ｘ表示氢原子、羟基、氰甲氧基、碳原子数１～３的烷氧基、碳原子数２～３的酰氧基、或者甲氧羰甲氧基。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：向井千贺，大角幸治，中川隆裕，吉村敏彦，金山由佳，大林洋子，开田健一，村田正弘，须贺泰世，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]