一种食管癌的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种食管癌的生物标志物及其应用，所述标志物为中胚叶特异性转录子，该生物标志物的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；作为食管癌转移诊断和生存预后的生物标志物，中胚叶特异性转录子能够用于制备食管癌辅助诊断、疗效评估以及转移复发监控的试剂和/或药物，效果显著，特异性好。

A biomarker of esophageal cancer and its application

The invention discloses a biomarker of esophageal cancer and its application, the marker for embryo leaf specific transcript, the biomarkers of the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 shown as metastasis of esophageal cancer; diagnosis and prognostic biomarkers, mesodermal specific transcripts can for the preparation of diagnosis, curative effect evaluation and monitoring of recurrence and metastasis of esophageal cancer reagent and / or drugs, significant effect, good specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种食管癌的生物标志物及其应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种食管癌的生物标志物及其应用。
技术介绍
食管癌是世界上高死亡率的癌症之一，5年生存率不足20％，在中国，食道癌主要表现为食管鳞状细胞癌(Esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)。尽管临床技术的发展提高了部分食管鳞癌患者的生存率，但食管癌的高死亡率主要归因于肿瘤转移。肿瘤转移包括癌细胞的侵袭，血管增生，在特定器官组织扩散和增殖等一系列的过程，是癌症最致命的特征，占癌症死亡相关原因的90％以上。如佩吉特提出的癌细胞转移“种子和土壤”假说，肿瘤细胞的内在特性和宿主的反应是这一过程的决定因素。在广泛的肿瘤类型中存在同一异质性转移潜能的细胞亚群。然而，很少食管癌转移相关基因的信息和功能验证。已知中胚叶特异性转录子(Mesoderm-specifictranscript,MEST)在多种生物学过程中具有重要作用，包括作为人类脂肪细胞的抑制剂，通过骨骼肌印迹基来因网络调控肌肉再生等。然而，极少有关于中胚叶特异性转录子在肿瘤中，特别是在食管癌中的研究。因此，开发食管癌生存预后或早期诊断的生物标志物，阐明食管癌发生和转移的分子机制，将有助于研发有效的治疗方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足及实际的需求，本专利技术提供一种食管癌的生物标志物及其应用，所述生物标志物为中胚叶特异性转录子(Mesoderm-specifictranscript,MEST)，氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；该食管癌早期诊断和生存预后的生物标志物能够用于制备食管癌辅助诊断、疗效评估以及转移复发监控的试剂和/或药物，效果显著，特异性好。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种食管癌的生物标志物，所述生物标志物为MEST(中胚叶特异性转录子)。专利技术人在充分研究食管癌的发展转移机制的基础上，通过大量实验筛选食管癌的生物标志物，发现MEST的高表达与食管癌的发生与转移高度相关，设计严谨多维的实验探究并验证了MEST作为食管癌早期诊断和生存预后的生物标志物的结论，发现了一种食管癌新的生物标志物及其用于制备食管癌辅助诊断、疗效评估以及转移复发监控的试剂和/或药物的新应用。所述MEST的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；所述SEQIDNO:1所示的氨基酸序列为：MVRRDRLRRMREWWVQVGLLAVPLLAAYLHIPPPQLSPALHSWKSSGKFFTYKGLRIFYQDSVGVVGSPEIVVLLHGFPTSSYDWYKIWEGLTLRFHRVIALDFLGFGFSDKPRPHHYSIFEQASIVEALLRHLGLQNRRINLLSHDYGDIVAQELLYRYKQNRSGRLTIKSLCLSNGGIFPETHRPLLLQKLLKDGGVLSPILTRLMNFFVFSRGLTPVFGPYTRPSESELWDMWAGIRNNDGNLVIDSLLQYINQRKKFRRRWVGALASVTIPIHFIYGPLDPVNPYPEFLELYRKTLPRSTVSILDDHISHYPQLEDPMGFLNAYMGFINSF。第二方面，本专利技术提供一种检测如第一方面所述生物标志物的方法；优选地，所述方法为检测样本中的中胚叶特异性转录子蛋白的表达上调。优选地，所述样本包括器官组织和/或血清样本。优选地，所述方法具体包括如下步骤：(1)收集器官组织并制备成组织微阵列，进行预处理；(2)将步骤(1)预处理后的切片在柠檬酸盐溶液中加热，进行抗原修复；(3)将步骤(2)修复后的切片过夜孵育特异性的人单克隆抗体，并孵育相应二抗；(4)将步骤(3)得到的切片孵育生物素过氧化酶后，进行组织化学染色，然后用苏木精复染，分析相关数据。作为一个具体的实施例，步骤(1)所述的预处理为脱蜡和水化。作为一个具体的实施例，步骤(2)所述柠檬酸盐溶液的浓度为8-12nM，例如可以是8nM、9nM、10nM、11nM或12nM，优选为10nM。作为一个具体的实施例，步骤(2)所述柠檬酸盐溶液的pH值为5-7，例如可以是5、6或7，优选为6。作为一个具体的实施例，步骤(2)所述抗原修复的时间为10-20min，例如可以是10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、18min或20min，优选为15min；作为一个具体的实施例，所述加热的温度为常压下100℃煮沸，维持恒温。作为一个具体的实施例，步骤(3)所述人单克隆抗体为兔抗人MEST特异性单克隆抗体。作为一个具体的实施例，步骤(4)所述组织化学染色的显色剂为3,3'-二氨基联苯胺。作为优选技术方案，一种检测如第一方面所述生物标志物的方法，具体步骤如下：(1)收集器官组织样本并制备成组织微阵列，进行脱蜡和水化处理；(2)将步骤(1)处理后的切片在8-12nMpH5-7的柠檬酸盐溶液中加热煮沸维持10-20min，进行抗原修复；(3)将步骤(2)修复后的切片过夜孵育兔抗人MEST特异性单克隆抗体，并孵育相应二抗；(4)将步骤(3)得到的样品孵育生物素过氧化酶后，进行组织化学染色，显色剂为3,3'-二氨基联苯胺，然后用苏木精复染，分析相关数据。优选地，所述方法具体包括如下步骤：收集血清样本，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中的中胚叶特异性转录子的表达是否上调。在一个具体的实施例中，一种检测如第一方面所述生物标志物的方法，步骤如下：包被，加入血清样本，加入酶标抗体，显色，终止反应，结果判定。第三方面，本专利技术提供一种将第一方面所述生物标志物用于制备食管癌诊断试剂和/或药物的应用。第四方面，本专利技术提供一种将第一方面所述生物标志物用于制备食管癌疗效评估试剂和/或药物的应用。第五方面，本专利技术提供一种将第一方面所述生物标志物用于制备食管癌转移复发监控试剂和/或药物的应用。优选地，所述食管癌为早期食管癌、中期食管癌或晚期食管癌中的任意一种。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术提供的生物标志物MEST在食管癌组织及食管癌转移组织中大量表达，统计分析存在显著差异，能够有效标记食管癌的发生，为食管癌的诊断、疗效评估以及转移复发监控提供有力工具，为阐明食管癌的发生转移机制提供重要支持。(2)本专利技术提供的MEST的应用为制备食管癌诊断、疗效评估以及转移复发监控的试剂和/或药物，是MEST的新应用，为MEST的应用和研究开拓了新的思路。附图说明图1为本专利技术对切片的免疫染色结果进行评分的规则图，其中，1代表阴性结果，2代表弱阳性结果，3代表中阳性结果，4代表强阳性结果；图2为本专利技术中正常组织与食管癌组织的染色结果及分析图，其中图2(A)为正常组织与食管癌组织的染色结果图，图2(B)为正常组织与食管癌组织的染色结果的Pearson卡方检验分析；图3为本专利技术中基于组织芯片免疫组织化学数据的Kaplan-Meier生存分析结果图；图4为本专利技术中食管癌组织与食管癌转移组织的染色结果及分析图，其中图4(A)为食管癌组织与食管癌转移组织的染色结果图，图4(B)为食管癌组织与食管癌转移组织的染色结果的Pearson卡方检验分析；图5为本专利技术中健康对照组血清与食管癌患者血清的MEST含量图。具体实施方式为更进一步阐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食管癌的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为中胚叶特异性转录子。

【技术特征摘要】
1.一种食管癌的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为中胚叶特异性转录子。2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。3.一种检测如权利要求2所述生物标志物的方法，其特征在于，所述方法为检测样本中的中胚叶特异性转录子的表达上调。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述样本包括器官组织和/或血清样本。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)收集器官组织并制备成组织微阵列，进行预处理；(2)将步骤(1)预处理后的切片在柠檬酸盐溶液中加热，进行抗原修复；(3)将步骤(2)修复后的切片过夜孵育特异性的人单克隆抗体，并孵育相...

【专利技术属性】
技术研发人员：许雯雯，李斌，李军旗，廖化新，
申请(专利权)人：暨南大学，珠海泰诺麦博生物技术有限公司，广州泰诺迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44