编码与感觉转导有关的G蛋白γ亚基的核酸制造技术

本发明专利技术提供了感觉细胞特异性Ｇ蛋白γ亚基的分离的核酸和氨基酸序列，这些亚基的抗体，检测这些核酸和亚基的方法，和筛选感觉细胞特异性Ｇ蛋白γ亚基的调节剂的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了感觉细胞特异性G蛋白γ亚基的分离的核酸和氨基酸序列，这些亚基的抗体，检测这些核酸和亚基的方法，和筛选感觉细胞特异性G蛋白γ亚基的调节剂的方法。
技术介绍
味觉转导是动物化学转导的最复杂形式之一(见例如，Margolskee，生物学论文15:645-650(1993)；Avenet&Lindemann，膜生物学杂志112:1-8(1989))。整个动物界，从简单的多细胞动物到最复杂的脊椎动物都发现了味觉信号传递；其主要目的是提供对不挥发配体的可靠信号传递反应。认为这些感觉的每一种是由受体或通道介导的独特信号传导途径所介导的，导致受体细胞去极化，产生受体或作用潜能，并在味觉传入神经元突触处释放神经递质(见例如，Roper，神经科学年鉴12:329-353(1989))。据信哺乳动物具有5种基本的味觉甜、苦、酸、咸和鲜(谷氨酸钠的味道)(见例如，Kawamura&Kare，鲜味的介绍一种基本味觉(1987)；Kinnamon&Cummings，生理学年鉴54:715-731(1992)；Lindermann，生理学综述76:718-766(1996)；Steward等，美国生理学杂志272:1-26(1997))。对人的广泛精神物理学研究已报道，舌头的不同区域显示不同的味偏好(见例如，Hoffmann,Menchen.Arch.Path.Anat.Physiol.62:516-530(1875)；Bradley等，Anatomical Record 212:246-249(1985)；Miller&Reedy，生理行为47:1213-1219(1990))。对动物的许多生理学研究也已显示了味觉受体细胞可选择性的对不同的味道作出反应(见例如Akabas等，科学242:1047-1050(1988)；Gilbertson等，普通生理学杂志100:803-24(1992)；Bernhardt等，生理学杂志490:325-336(1996)；Cummings等，神经生理学杂志75:1256-1263(1996))。在哺乳动物中，味觉受体细胞集中于分布在舌上皮不同乳头中的味蕾中。舌最后部发现的周缘乳头含有成百(小鼠)上千(人)个味蕾，而且对苦味物质特别敏感。叶状乳头(位于舌后侧两边缘)含有几十到几百个味蕾，对酸和苦味物质特别敏感。含有一个或几个味蕾的蕈状乳头位于舌前部，据认为介导大部分甜味感觉。每个味蕾视物种的不同，含有50-150个细胞，包括前体细胞、支持细胞和味觉受体细胞(见例如Lindermann生理学综述76:718-766(1996))。受体细胞受其基底处传入神经末梢支配，这些神经末梢通过脑干和丘脑的突触将信息传递给大脑皮质的味觉中枢。阐明味觉细胞信号传导和信息处理的机制，对于理解味觉功能、调节和“感觉”是关键的。虽然对于味觉细胞功能的精神物理学和生理学已有了不少了解，但对于介导这些感觉信号传递反应的分子和途径所知很少(Gilbertson综述，神经生物学当前观点3:532-539(1993))。电生理学研究提出，酸味和咸味由H+和Na+离子通过细胞尖端表面的特殊膜通道直接进入细胞来调节味觉细胞功能。就酸性化合物而言，假定H+封闭了K+通道(见例如，Kinnamon等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:7023-7027(1988))或pH敏感性通道的活化(见例如，Gilbertson等，遗传生理学杂志100:803-24(1992))导致味觉细胞去极化；咸味转导可能是由Na+通过阿米洛利敏感性Na+通道进入而部分介导的(见例如Heck等，科学，223:403-405(1984)；Brand等，大脑研究207-214(1985)；Avenet等，自然331:351-354(1988))。据信甜、苦和鲜味觉转导是由G-蛋白偶联受体(GPCR)信号传递途径介导的(见例如，Striem等，生物化学杂志260:121-126(1989)；Chaudhari等，神经学杂志16:3817-3826(1996)；Wong等，自然381:796-800(1996))。令人不解的是，甜味觉和苦味觉转导的信号传递途径模型和GPCR级连反应的效应物酶(如G蛋白亚基、cGMP磷酸二酯酶、磷脂酶C、腺苷酸环化酶；见例如，Kinnamon&Margolskee，神经生物学当前观点6:506-513(1996))几乎一样多。然而，对于参与味觉传导的特异性膜受体，或许多受单种味觉转导途径活化的胞内单种信号传递分子知之甚少。鉴定这些分子对苦味拮抗剂、甜味促效剂和咸与酸味调节剂在许多制药工业和食品工业中的应用是重要的。味觉受体(包括味觉离子通道)和味觉信号传递分子，如与信号传递有关的G-蛋白亚基和酶的鉴定和分离，将使人们能够对味觉转导途径作药物学和遗传学调节有所了解。例如，受体和通道分子的获得将允许我们筛选味觉细胞活性的高亲和力促效剂、拮抗剂、反向促效剂和调节剂。然后可将这些味觉调节化合物用于制药工业和食品工业，来按需要改变味道。另外，这些味觉细胞特异性分子在产生味觉局部解剖图上起着无价工具的作用，以阐明舌的味觉细胞和连接大脑味觉中枢的味觉神经元之间的关系。专利技术简述因此，本专利技术首次提供了编码味觉细胞特异性G蛋白γ亚基的核酸。这些核酸及其编码的多肽称为“TC-G gamma”或“TC-Gγ”，代表G蛋白γ亚基。这些味觉细胞特异性G蛋白γ亚基是味觉转导途径的成员。一方面，本专利技术提供了一种编码感觉细胞特异性G蛋白γ亚基多肽的分离核酸，该多肽含有与SEQ ID NO:2氨基酸序列约90％以上相同的氨基酸序列。在一实施例中，该核酸包含SEQ ID NO:1的核苷酸。在另一个实施例中，用能在严格杂交条件下与编码选自MEEWDVPQM(SEQ ID NO:4)和VEKAKCTIL(SEQID NO:5)的氨基酸序列的简并引物组相同的序列选择性杂交的引物，扩增该核酸。一方面，本专利技术提供了一种编码感觉细胞特异性G蛋白γ亚基多肽的分离核酸，其中该核酸在高度严格条件下与具有SEQ ID NO:1的序列的核酸选择性杂交。一方面，本专利技术提供了一种编码感觉细胞特异性G蛋白γ亚基多肽的分离核酸，该多肽含有与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列约90％以上的氨基酸序列相同，其中该核酸在中度严格条件下与SEQ ID NO:1的核苷酸序列选择性杂交。一方面，本专利技术提供了一种分离的感觉细胞特异性G蛋白γ亚基多肽，该核酸含有与SEQ ID NO:2氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在一个实施例中，该多肽与针对SEQ ID NO:2产生的多克隆抗体特异性结合。在一个实施例中，该多肽与针对SEQ ID NO:2，而不是针对SEQ ID NO:3产生的多克隆抗体特异性结合。在另一个实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在另一个实施例中，该来自人、大鼠或小鼠。一方面，本专利技术提供了一种与一多肽选择性结合的抗体，该多肽具有与SEQID NO:2的氨基酸序列约90％以上相同的氨基酸序列。一个方面，本专利技术提供了一种表达载体，它包含一种核酸，该核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸，其特征在于，该核酸编码一种感觉细胞特异性Ｇ蛋白γ亚基多肽，该多肽含有与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的氨基酸序列９０％以上相同的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：CS朱克，JE阿德莱尔，D科恩，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]