一种测定植物样本中可溶性糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定植物样本中可溶性糖的方法，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于100～110℃杀青30min后80℃烘至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.03～0.08g；第二步，用80％乙醇提取3次后将上清液合并，入活性炭1～3g，静止脱色12～48h；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，加入2ml0.2％的蒽酮试剂，经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。本方法可操作性强、简单易行，重复性好，提高了测定含有色物质植物器官可溶性糖的准确性，有助于对植物体内碳代谢的变化进行精确的预测。

A method for the determination of soluble sugar in plant samples

The invention discloses a method for the determination of soluble sugar in plant samples, including the following steps: firstly, preparing samples of plants, plant roots dug up, by ear, stem and leaf organs separately, and placed in the temperature of 100~110 DEG 30min after fixing 80 DEG C dried to constant weight, take the above 100 items the sample sieve samples ranged from 0.03 to 0.08g; the second step, extracted with 80% ethanol 3 times into the supernatant with activated carbon, 1 ~ 3G, 12 ~ 48h was still; the third step, soluble sugar determination, the sample solution is the activated carbon volume to 50ml, from 0.5ml extract plus 0.5ml the water, the anthrone reagent adding 2ml0.2%, after boiling water bath for 15min, after cooling to room temperature for spectrophotometric determination of od in 620nm, a standard curve is calculated. The method is operable, simple and reproducible, which improves the accuracy of determining soluble sugar in plant organs containing colored substances, and helps to predict the changes of carbon metabolism in plants accurately.

【技术实现步骤摘要】
一种测定植物样本中可溶性糖的方法
本专利技术涉及一种测定植物样本中可溶性糖的方法，属于农业

技术介绍
碳代谢是植物体内最重要的代谢过程之一，碳代谢的强弱以及其与氮代谢的协调程度不仅影响植物的生长发育，而且与作物产量的高低和品质的优劣紧密相关。而可溶性糖作为高等植物光合产物，既是植物碳代谢的主要形式，也是一种重要的渗透调节物质，在干旱胁迫过程中植物体内可溶性糖含量的变化在一定程度上能反映其对不良环境的适应能力。目前测定植物样本中可溶性糖最常用的方法是蒽酮比色法，其原理是利用可溶性糖与硫酸作用产生糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色络合物，在低浓度时625nm的OD值与糖含量成正相关，该方法操作简便、快速，而且成本低廉，适宜于一般的实验室分析操作。但是由于样品本身有色物质的存在，测定时往往会出现吸光度偏大的情况，最终导致实验结果不准确，影响实验者对数据的统计分析。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种测定植物样本中可溶性糖的方法，提高测定含有色物质植物器官可溶性糖的准确性，有助于对植物体内碳代谢的变化进行精确的预测。本专利技术一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于100～110℃杀青30min后80℃烘至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.03～0.08g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入活性炭1～3g，静止脱色12～48h后过滤；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，加入2ml0.2％的蒽酮试剂，经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。进一步的，加蒽酮试剂时，试管置于冷水浴中。进一步的，第一步中样品烘干至少72h。进一步的，第二步中加入活性炭3g，静止脱色12h。本方法可操作性强、简单易行，重复性好，提高了测定含有色物质植物器官可溶性糖的准确性，有助于对植物体内碳代谢的变化进行精确的预测，同时可以使测定结果保持相对稳定。具体实施方式实施例一一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于100℃杀青30min后80℃烘干72h至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.03g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入3ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入3ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入活性炭1g，静止脱色48h后过滤；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，试管于冷水浴中加入2ml0.2％的蒽酮试剂，然后经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。实施例二一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于105℃杀青30min后80℃烘干72h至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.05g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入5ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌30min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入5ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌30min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入活性炭2g，静止脱色24h后过滤；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，试管于冷水浴中加入2ml0.2％的蒽酮试剂，然后经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。实施例三一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于110℃杀青30min后80℃烘干72h至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.08g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入5ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌30min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌40min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入活性炭3g，静止脱色12h后过滤；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，试管于冷水浴中加入2ml0.2％的蒽酮试剂，然后经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。具体实验过程；所选材料为籼粳杂交稻甬优2640，将整个稻株自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置105℃杀青30min后80℃烘干至少72h至恒重，取过100目筛样品0.05g，经3次80％酒精提取后将提取液合并。设置定容至50ml前加活性炭、定容至50ml后加活性炭和不加活性炭三个主处理；加入活性炭的量分别设置1g、2g和3g；加入时间分别为12h、24h和48h。然后将样品过滤、定容(定容后加活性炭的不进行此步骤)，每个处理设3个重复；定容后吸取样品溶液0.5ml加上0.5ml纯水，试管于冷水浴中加入2ml0.2％的蒽酮试剂，然后经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。测蔗糖时用0.9ml蒸馏水+0.1ml2NNaOH+1ml0.1％间苯二酚+3ml10NHCl作参比；测可溶性糖用1ml蒸馏水+5ml蒽酮试剂作参比。实验结果如下表：本试验的结果显示，1)不加活性炭时，样品测定可溶性糖含量的结果要极显著大于加入活性炭的样品，说明在某种程度上活性炭的加入能够吸附提取液中有色物质，降低其对结果的干扰；2)在加入活性炭的处理中，定容前活性炭处理结果要低于定容后活性炭处理结果，其中以加入1g和3g活性炭，在相同时间处理的条件下差异最大，均达0.01显著水平。该结果表明，在定容前加入活性炭所吸收的有色物质的效果强于定容后加活性炭的效果；3)在定容前加入相同质量活性炭条件下，有且仅有加入量为3g时，测定结果在不同时间处理下较为稳定，其极差为0.3，而其他处理的极差均大于1。说明当活性炭过量的情况下，能够快速的吸附有色物质，当活性炭不足的条件下，其吸附能力便随处理时间的延长逐渐加强。由此推断，若活性炭不足但处理时间足够长亦有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于100～110℃杀青30min后80℃烘至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.03～0.08g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入活性炭1～3g，静止脱色12～48h后过滤；第三步，可溶性糖测定，将活性炭处理后的样品溶液定容至50ml，吸取0.5ml提取液加上0.5ml的水，加入2ml0.2％的蒽酮试剂，经过沸水浴15min，冷却至室温后用分光光度计在620nm处测定OD值，做成标准曲线进行计算。

【技术特征摘要】
1.一种测定植物样本中可溶性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备植物样本，将植物自根部挖出后，按穗、茎、叶将各器官分开，并置于100～110℃杀青30min后80℃烘至恒重，取过100目以上的样品筛筛取样品0.03～0.08g；第二步，提取可溶性糖，1)、将样品加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，收集上清液；其残渣加入3～8ml浓度80％的乙醇中，置于80℃水浴不断搅拌20～40min，以4000rpm离心处理10min，再重复提取两次后合并上清液；2)、在上清液中加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵轶鹏，赵新勇，王健康，丁成伟，郭荣良，徐家安，吴玉玲，王友霜，胡婷婷，
申请(专利权)人：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32