一种识别K562内Ag制造技术

本发明专利技术公开一种能识别K562细胞内Ag

A kind of identification in K562 Ag

The invention discloses a kind of identification of Ag in K562 cells

【技术实现步骤摘要】
一种识别K562内Ag+的萘酰亚胺类化合物荧光探针及其制备方法
本专利技术涉及一种能识别K562细胞内Ag+的萘酰亚胺类化合物荧光探针及其制备方法，属于金属离子的荧光探针领域。
技术介绍
银是人体组织内的微量元素之一。微量的银不但能帮助人体抵抗有害的侵袭病菌，它还能帮助修复和重建对生命至关重要的人体组织，但是Ag+过量会阻断生物体的代谢系统，对人体具有非常大的危害。联合国世界卫生组织(WHO)明确规定银对人体的安全值为0.05mg/L以下，饮用水中银离子的限量为0.05mg/L．如果饮用水里的银含量超过0.05mg/L就会产生明显的毒负作用．目前银的化合物被广泛应用于人类生活的各行各业，因此，发展银离子的快速检测不论是对水质控制还是对环境保护以及人类生活都有积极的作用。目前常用于检测Ag+分析检测方法目前主要是利用Ag+和指示剂(也可称为化学分子探针)之间的特异性化学反应或超分子作用产生的信号变化来对Ag+进行分析检测，这些荧光探针分子对Ag+有高选择性以及较高的灵敏度。本专利技术提供了一种能够识别K562细胞内Ag+的荧光探针萘酰亚胺类化合物及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是一种能识别K562细胞内Ag+的萘酰亚胺类化合物荧光探针及其制备方法。本专利技术提供的荧光探针对K562细胞内Ag+的识别结果准确，灵敏度高。本专利技术提供的能够识别K562细胞内Ag+的萘酰亚胺类化合物，具有式(I)所示本专利技术还提供了一种能识别K562细胞内Ag+的萘酰亚胺类化合物荧光探针的制备方法。更详细地说是以4-溴-1,8-萘酐、氨基取代氮杂环为原料，合成出中间体N取代4-溴-1,8-萘酰亚胺，然后中间体与氨基取代氮杂环合成萘酰亚胺类化合物化合物。实现本专利技术的技术方案如下：反应步骤如下：（1）将4-溴-1,8-萘酐、2-氨基吡啶、无机碱、氯化铜放入甲苯中，N2保护加热回流后，反应结束后得到粗产物，经重结晶得到纯的化合物（Ⅱ），为黄色固体。（2）将化合物（Ⅱ）与4-硝基苯甲醛、2-氨基吡啶、无机碱和碘化亚铜溶于DMF中加热回流，反应后经柱层析得到化合物（I），为橙黄色晶体。根据本专利技术，优选的，步骤（1）所述的4-溴-1,8-萘酐、2-氨基吡啶的摩尔比为1:1；根据本专利技术，优选的，步骤（2）所述的化合物（Ⅱ）N-（2-吡啶基）4-溴-1,8-萘酰亚胺、2-氨基吡啶的摩尔比为1:1；根据本专利技术，优选的，步骤（1）所述的反应温度为90-140℃，更优选为110-120℃；根据本专利技术，优选的，步骤（2）所述的反应温度为90-140℃，更优选为100-120℃；根据本专利技术，优选的，步骤（1）所述催化剂氯化铜加入量为4-溴-1,8-萘酰亚胺的摩尔量的2倍到3倍；根据本专利技术，优选的，步骤（2）所述催化剂碘化亚铜加入量为过量；根据本专利技术，步骤（1）所述的无机碱可以为氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾或磷酸钾，优选的为氢氧化钠；根据本专利技术，优步骤（2）所述无机碱可以为氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾或碳酸铯，优选的为碳酸铯；更为详细的，所述的能够识别K562细胞内Ag+的萘酰亚胺类化合物荧光探针的制备方法，步骤如下：（1）在装有回流冷凝装置的100ml的圆底烧瓶中依次加入1mmol4-溴1,8-萘酐、1mmol2-氨基吡啶、2mmol氢氧化钠以及2mmol氯化铜于20ml的甲苯中，反应温度设定115℃。采用SchlenkLine技术N2保护下回流，TLC监测反应，17h后，完成反应。放置过夜，静置室温后，析出固体，过滤，再以40ml的甲苯重结晶，得化合物（Ⅱ），收率82%。（2）称取化合物（Ⅱ）1mmol的N-(2-吡啶基)-4-溴-1，8-萘酰亚胺，1mmol的2-氨基吡啶，2mmol的碳酸铯以及过量的碘化亚铜于20ml的DMF中。采用SchlenkLine技术N2保护下回流，TLC监测反应，17h后，完成反应。放置过夜，静置室温后，析出固体，过滤，再以40ml的甲苯重结晶，得化合物（Ⅱ），收率75%。具有式（I）结构的化合物，应用于识别K562细胞内Ag+的荧光探针本专利技术的优点是：与现有技术相比，本专利技术提供了一种能够识别K562细胞内Ag+的荧光探针萘酰亚胺化合物的制备方法，本专利技术提供的能够识别K562细胞内Ag+的荧光探针萘酰亚胺化合物具有式（I）的结构，本专利技术所述的萘酰亚胺荧光探针可以用于K562细胞内Ag+检测，对Ag+灵敏度高，响应值高；实验结果表明，本专利技术所述化合物作为荧光探针使用于K562细胞时，对Ag+有显著的响应；对于不同浓度的Ag+检测时呈良好的线性关系，在K562细胞内对Ag+有很好的选择性，染有化合物萘酰亚胺的K562悬浮细胞经蓝光激发后，在显微镜中观察，细胞发出绿色荧光，检测方法可靠。附图说明图1为识别K562细胞内银离子荧光探针N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺的紫外吸收谱图。图1-1为识别K562细胞内银离子荧光探针N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺的荧光光谱图。图2为识别K562细胞内银离子荧光探针N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺在650nm的激发波长下测定对于Ag+选择性的荧光光谱图。图3为识别K562细胞内银离子荧光探针N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺在650nm的激发波长下测定加入不同浓度的Ag+前后的荧光光谱图。图4为K562悬浮细胞在银离子荧光探针N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺溶液中培养30min前后的荧光激发对比图，图中：（A）为K562悬浮细胞未激发的图像；(B)为在有化合物N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺的K562悬浮细胞经蓝光激发后，在显微镜中观察，细胞发出微弱的绿色荧光；(C)为K562悬浮细胞在N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺和Ag+混合溶液中培养30分钟后，染有N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺和Ag+的混合溶液的K562悬浮细胞经蓝光激发后细胞的荧光强度有增强。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：本实施例为根据所述式(I)结构化合物的反应流程制备的具体实施例。N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺：在装有回流冷凝装置的100ml的圆底烧瓶中依次加入1mmol4-溴1,8-萘酐、1mmol2-氨基吡啶、2mmol氢氧化钠以及2mmol氯化铜于20ml的甲苯中，反应温度设定115℃。采用SchlenkLine技术N2保护下回流，TLC监测反应，17h后，完成反应。放置过夜，静置室温后，析出固体，过滤，再以40ml的甲苯重结晶，得化合物（Ⅱ），收率82%。称取化合物（Ⅱ）1mmol的N-(2-吡啶基)-4-溴-1，8-萘酰亚胺，1mmol的2-氨基吡啶，2mmol的碳酸铯以及过量的碘化亚铜于20ml的DMF中。采用SchlenkLine技术N2保护下回流，TLC监测反应，17h后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能识别K562细胞内Ag

【技术特征摘要】
1.一种能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针，具有式（I）结构，具有式（I）结构，。2.权利要求1所述的能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）将4-溴-1,8-萘酐、2-氨基吡啶、无机碱、氯化铜放入甲苯中，N2保护加热回流后，反应结束后得到粗产物，经重结晶得到纯的化合物（Ⅱ），为黄色固体；（2）将化合物（Ⅱ）与2-氨基吡啶、无机碱和碘化亚铜溶于DMF中加热回流，反应后经柱层析得到化合物（I），为橙黄色晶体；。3.如权利要求2所述的能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针的制备法，其特征在于步骤（1）所述的反应温度为90-140℃，更优选为110-120℃。4.如权利要求2所述的能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针的制备方法，其特征在于步骤（2）所述的反应温度为90-140℃，更优选为100-120℃。5.如权利要求2所述的能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针的制备方法，其特征在于步骤（1）所述催化剂氯化铜加入量为4-溴-1,8-萘酰亚胺的摩尔量的2倍到3倍。6.如权利要求2所述的能识别K562细胞内Ag+的N-（2-吡啶基）-4-（2-吡啶基）-1.8-萘酰亚胺荧光探针的制备方法，其特征在于步骤（2）所述催化剂碘化亚铜加入量为过量...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯方，许贻文，张鹏，许建华，林小燕，林晨，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：福建,35