棉花Na+/H+反向转运蛋白基因及其克隆方法和应用技术

本发明专利技术涉及棉花中Ｎａ＃＋［＋］／Ｈ＃＋［＋］反向转运蛋白ＧｈＮＨＸ１基因的克隆、重组及耐盐性功能分析，属于分子生物学和生物技术领域。从０．４ｍｏｌ.Ｌ＃＋［－１］ＮａＣｌ处理的棉花叶片中提取总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ。利用兼并引物，进行常规聚合酶链式反应（ＰＣＲ），得到中间片段，然后进行３′和５′末端快速扩增获得全长ｃＤＮＡ。将该基因转入盐敏感酵母突变体，能在一定程度上恢复其抗盐能力。进一步利用该基因转化烟草，获得的转基因植株能在２００ｍｍｏｌ.Ｌ＃＋［－１］的盐浓度下正常生长。因此，该基因是一个重要的抗盐基因，可以用于转化盐敏感植物来提高其耐盐能力，对于盐敏感植物在盐碱地上的推广种植，具有非常重要的经济效益和社会效益。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及棉花中Na+/H+反向转运蛋白基因GhNHX1的克隆、重组及耐盐性功能的分析和应用，属于分子生物学和生物
由于Na+/H+反向转运蛋白基因在耐盐过程中所起的作用，本专利技术人从棉花中分离编码液泡型Na+/H+反向转运蛋白的基因。根据其它植物中发表的Na+/H+反向转运蛋白的氨基酸序列，设计引物，利用反转录-聚合酶链式反应，从棉花中分离出编码液泡型Na+/H+反向转运蛋白的基因。将该基因转入盐敏感酵母突变体，能在一定程度上恢复其抗盐能力。进一步构建正义表达载体，转化烟草，转基因植株具有较高的耐盐性，耐盐性可达200mmolL-1。该基因可用于植物的遗传转化，提高植物的耐盐能力。本专利技术首次从棉花中分离出编码液泡型Na+/H+反向转运蛋白的全长cDNA，连接到表达载体上，利用农杆菌侵染法转化烟草，获得的转基因植株耐盐性高达200mmolL-1。从棉花叶片中提取总RNA，然后将2微克总RNA反转录成cDNA。根据其它植物中的Na+/H+反向转运蛋白中保守的氨基酸序列，设计一对兼并引物正向引物5′-CC(GATC)CC(GATC)AT(TAC)AT(TAC)TT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个棉花Ｎａ↑［＋］／Ｈ↑［＋］反向转运蛋白基因ＧｈＮＨＸ１，其特征在于具有ＳＥＱ ＩＮ ＮＯ １所示的核甘酸序列，ＳＥＱ ＩＮ ＮＯ ２所示的氨基酸序列：（１）ＳＥＱ ＩＮ ＮＯ １的信息（ａ）序列特征：＊长度：２４８５碱基对 ＊类型：核酸＊链型：双链＊拓扑结构：线性（ｂ）分子类型：ｃＤＮＡ（ｃ）假设：否（ｄ）反义：否（ｅ）最初来源：棉花（ｆ）序列描述：ＳＥＱ ＩＮ ＮＯ．１ＡＣＧＣＧＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＴＴＧＡＴＴＴＴＧ ＡＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＣＴＣＣＣＡＴＣＧＡＡＡＧＣ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑成超，吴长艾，杨国栋，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]