艾滋病病毒0型株的一种抗体及其生产细胞系与应用制造技术

本发明专利技术公开了艾滋病病毒Ｏ型株的一个抗体及其生产细胞系与应用，本发明专利技术的目的是提供能与艾滋病病毒Ｏ型株专一结合的单克隆抗体，该抗体具有对表位ＤＥ，特别是表位ＥＬＤＥＷＡ的特异性。能够分泌与艾滋病病毒Ｏ型株专一结合的单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系１４Ｄ９，已于２００２年０６月２７日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明专利技术的单克隆抗体在鉴别、诊断ＨＩＶ－１病毒Ｏ型株、制备用于ＨＩＶ－１Ｏ型毒株感染被动免疫药物中将得到广泛应用。以本发明专利技术单克隆抗体为活性成份的药物可望在治疗艾滋病中得到应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及艾滋病病毒O型株的一个抗体及其生产细胞系与应用。最近国外抗艾滋病药物临床研究结果证明，在被动免疫治疗中，组合使用针对HIV-1膜蛋白gp160(膜蛋白gp120及跨膜蛋白gp41的前体蛋白)上的几个特定中和表位的中和抗体(其中包括ELDKWA表位特异性的单克隆抗体2F5)，能抑制HIV-1病毒的粘膜传染以及母婴传播，并能清除血液中的HIV-1病毒(Nature Medicine 1999，5204；Nature Medicine 2000，6200；Nature Medicine 1999，5211)；人免疫缺陷病毒(HIV-1)跨膜蛋白gp41上的主要中和表位ELDKWA的表位特异性单克隆抗体能够体外抑制多种HIV-1病毒株感染靶细胞(J.Virology 1993，676642；AIDS Res.Human Retroviruses 1994，101651；AIDS 1996，10587)。研究证明，HIV-1能够通过中和表位的限制性变异逃脱中和抗体的中和作用(Immunity 10，431-438，1999)。ELDKWA是公认的重要的HIV-1中和表位，该表位的保守性很强，但在D或K位点的某些限制性变异，能够使病毒逃脱单抗的中和作用。专利技术人通过对HIV数据库(http//hiv-web.lanl.gov)的检索发现，所有HIV-1病毒O型株的跨膜蛋白gp41均带有ELDEWA表位(如表1所示)，而其它HIV-1病毒亚型不带有此表位，进一步证实ELDEWA是HIV-1病毒O型株的特有表位，可用于HIV-1病毒O型株鉴别和诊断的靶位点，也可以作为治疗药物的靶位点。表1HIV-1病毒O型株带有特征性的ELDEWA表位 本专利技术的目的是提供能与艾滋病病毒O型株专一结合的单克隆抗体，该抗体具有对表位DE，特别是表位ELDEWA的特异性。能够分泌与艾滋病病毒O型株专一结合的单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系14D9，已于2002年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC №0753。小鼠杂交瘤细胞系14D9产生的单克隆抗体14D9能够特异性识别HIV-1病毒0型株跨膜蛋白gp41特有的ELDEWA-表位，而不识别其它HIV-1病毒亚型所携带ELDKWA-、ELNKWA-和ELEKWA-表位。本专利技术的单克隆抗体在鉴别、诊断HIV-1病毒O型株、制备用于HIV-1 O型毒株感染被动免疫药物中将得到广泛应用。以本专利技术单克隆抗体为活性成份的药物可望在治疗艾滋病中得到应用。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1、鼠类来源的杂交瘤细胞系14D9的制备过程1、人工合成一条含有HIV-10型株跨膜蛋白gp41特有的ELDEWA-表位的表位多肽，该表位多肽含有4次重复的ELDEWA-免疫学表位，其氨基酸残基序列为CELDEWAGELDEWAGELDEWAGELDEWA；2、利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)将上述表位多肽与载体蛋白BSA耦联；3、将上述耦联物与福氏佐剂混合(两种物质的重量比为，耦联物∶福氏佐剂＝1∶1)免疫Balb/c小鼠，每两周免疫一次。首次使用完全福氏佐剂，以后使用不完全福氏佐剂。每次免疫抗原剂量为含10微克表位多肽的耦联物/次/只，共免疫3次；4、将免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞采用常规细胞融合技术融合，并制备杂交瘤，从杂交瘤细胞中筛选出能分泌ELDEWA-表位特异性单克隆抗体的杂交瘤；5、克隆杂交瘤，获得能分泌ELDEWA-表位特异性单克隆抗体的克隆杂交瘤细胞系14D9。实施例2、本专利技术抗体对HIV-1病毒O型株ELDEWA-表位的特异性识别将杂交瘤细胞系14D9分泌的单克隆抗体与带有不同表位的重组、可溶性gp41融合蛋白进行温浴反应，结果如附图说明图1所示，从图中的结果可以看出，杂交瘤细胞系14D9分泌的单克隆抗体对HIV-1病毒O型株ELDEWA-表位具有特异性识别，图中，A分子量蛋白；B本专利技术单克隆抗体识别带有ELDEWA表位的rsgp41(GST-rsgp41ELDEWA)〔42KD〕；C本专利技术单克隆抗体不识别带有ELDKWA表位的rsgp41(GST-rsgp41ELDKWA)；D本专利技术单克隆抗体不识别GST；E本专利技术单克隆抗体识别含有ELDEWA表位的GST-ELDEWA(26KD)。权利要求1.鼠类来源的杂交瘤细胞系14D9，CGMCC №0753。2.由保藏号为CGMCC №0753的杂交瘤细胞系14D9产生的单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体具有艾滋病病毒O型株DE表位特异性。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体具有艾滋病病毒O型株LDEW表位特异性。5.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体具有艾滋病病毒O型株ELDEWA表位特异性。6.权利要求2-5中任意一项所述的单克隆抗体在鉴别、诊断HIV-1病毒O型株中的应用。7.权利要求2-5中任意一项所述的单克隆抗体在制备用于HIV-1 O型毒株感染被动免疫药物中的应用。8.以权利要求2-5中任意一项所述的单克隆抗体为活性成份的药物。全文摘要本专利技术公开了艾滋病病毒O型株的一个抗体及其生产细胞系与应用，本专利技术的目的是提供能与艾滋病病毒O型株专一结合的单克隆抗体，该抗体具有对表位DE，特别是表位ELDEWA的特异性。能够分泌与艾滋病病毒O型株专一结合的单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系14D9，已于2002年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本专利技术的单克隆抗体在鉴别、诊断HIV－1病毒O型株、制备用于HIV－1O型毒株感染被动免疫药物中将得到广泛应用。以本专利技术单克隆抗体为活性成份的药物可望在治疗艾滋病中得到应用。文档编号C07K16/08GK1472313SQ0212537公开日2004年2月4日 申请日期2002年7月29日 优先权日2002年7月29日专利技术者陈应华, 黄金 申请人:清华大学, 北京清大英华生物技术有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
鼠类来源的杂交瘤细胞系１４Ｄ９，ＣＧＭＣＣ №０７５３。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈应华，黄金，
申请(专利权)人：清华大学，北京清大英华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]