作为多种治疗模式基础的蛋白质的选择性剪接形式制造技术

来源于与疾病或生理状态相关的蛋白质选择性剪接形式的多肽或抗体被作为治疗或预防药物。来源于血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）家族蛋白质的选择性剪接形式的多肽或抗体在预防或诱导肿瘤的消退中是特别有用的。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白质的选择性剪接形式在肿瘤或其它疾病状态的预防或治疗中的鉴别和应用。
技术介绍
传统上讲，疫苗来源于与被接种生物体完全外源的物质。尽管如此，人们还是希望用源于生物体自身蛋白质的疫苗来免疫生物体。例如，感染的控制、抑制排卵或其它形式的避孕、阿尔海默氏(Alzhiemer’s)病的抑制、肿瘤生长的预防与抑制都是受益于内源性“自体蛋白”免疫的疾病和状况。多肽疫苗可用于治疗患有疾病或异常细胞的受试者。例如，感染了病毒、细胞内细菌或寄生虫的细胞，以及肿瘤细胞等。多肽疫苗可以诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)对疾病或异常细胞的应答。细胞毒T淋巴细胞(CTLs)通过直接的细胞毒性，并通过对其它免疫细胞如巨嗜细胞、B细胞和其它类型的T细胞提供特异性和非特异性的帮助，而摧毁疾病或异常的细胞。多肽疫苗也可以诱导抗体应答，这对疾病或病况的预防和治疗种是有用的。目前的多肽疫苗技术包括对与特定病况的发病机制有关的内源性正常蛋白质的鉴定。正常的总蛋白质可以作为疫苗的基础。或者，对预测与组织相容性复合物类型I或类型II的基序相结合的内源性蛋白质进行鉴定，并以之来生产疫苗。见Falk等，Nature 351290，1991。但是，仅用部分或全部的正常蛋白质序列制成的多肽疫苗对疾病或不正常细胞是弱的免疫原，而且还可以诱发针对表达正常蛋白质细胞的免疫反应。以前提高多肽疫苗的特异免疫原性的努力主要集中在各种类型癌细胞来源的内源性蛋白质的点突变上。这些点突变表现为在大的内源性蛋白质序列中的小部分“非自身”区域，它可以用于引起免疫应答。但是，这些点突变并不能被免疫系统有效识别，并且使用这种技术的多肽疫苗还不能产生强的免疫应答。多肽疫苗也以有时出现在癌细胞中的基因重排(例如缺失、染色体重排)中产生的蛋白质产物为基础。在慢性骨髓性白血病细胞中染色体9∶22易位产生BCR/Ab1融合蛋白。该蛋白在BCR/Ab1融合接头处含有一个“非自身”区域，并且在患病人体中引发了免疫应答。然而这种基因重排是很少的，并且仅知道染色体易位在癌症中发生。因此，从染色体重排产生的蛋白质产物制备疫苗的有用性受到了限制。因此，希望找到在一种特定的疾病状态下特异存在于某些组织中内源性蛋白质，它们也含有产生强免疫应答例如细胞毒T淋巴细胞或抗体应答的“非自身”免疫区域。理想的是这些改变了的内源性蛋白质是普遍存在的，并且很少或不会诱发针对相应正常蛋白质的交叉反应。某些基因的初级RNA转录物可以进行选择性剪接以产生信使RNA(mRNA)，它们与该基因产生的大部分mRNA是不同的。这些选择性剪接的mRNA翻译成选择性剪接形式的蛋白质，它们含有与相应的正常剪接mRNA产生的蛋白质不同的氨基酸序列。选择性剪接形式的蛋白质通常在一定生理或病理状态下以组织特异性的方式表达。这样，这些选择性剪接的mRNA在患有特定疾病或病况的病人体内仅存在于少量的细胞中。例如，我们知道许多类型的癌症细胞产生的选择性剪接形式在同一病人的正常细胞中并未发现。其它特异性地产生选择性剪接形式的疾病包括糖尿病、阿尔海默氏病和全身性红斑狼疮。迄今为止，这种选择性剪接形式还未被认作为能够针对产生选择性剪接形式、来自于疾病或异常组织的细胞的疫苗来源。专利技术概述现在已经发现来自患病或异常细胞的蛋白质选择性剪接形式具有高的免疫原性。这种多肽引发针对多肽的“非自身”区域的强免疫应答，特别是这些多肽可以引发特异性的CTL应答。这些多肽可用于以某些细胞中存在选择性剪接形式为特征的疾病或状况的治疗或预防。因此，本专利技术提供了一种多肽，其包含独特于一种选择性剪接形式的氨基酸序列，其中由受试者的患病或异常细胞产生的选择性剪接形式在受试者的正常细胞中基本上不存在。本专利技术还提供了一种鉴别免疫原性多肽的方法，用来治疗患有，或存在患有疾病或病况风险的受试者，其中患病或异常的细胞产生至少一种选择性剪接形式，该选择性剪接形式在正常细胞中基本上不存在。该方法包括鉴别至少一种mRNA，其编码至少一种选择性剪接形式；确定至少一种选择性剪接形式的至少一部分氨基酸序列；并产生至少一种多肽，其包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列。本专利技术还提供了一种治疗患有，或存在患病或病况风险的受试者的方法，其中患病或异常的细胞产生至少一种选择性剪接形式，该选择性剪接形式在正常细胞中基本上不存在。该方法包括对受试者给予有效量的至少一种多肽，其包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列，以产生针对疾病或异常细胞的免疫应答。本专利技术还提供了一种在具有肿瘤患病风险的主体中预防或延缓肿瘤发生的方法，其中的肿瘤细胞产生至少一种选择性剪接形式，该剪接形式在非肿瘤细胞中基本上不存在。该方法包括给予受试者有效量的至少一种多肽，其包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列，以产生针对肿瘤细胞的免疫应答。本专利技术还提供了一种在患肿瘤受试者中使肿瘤消退的方法，其中的肿瘤细胞产生至少一种选择性剪接形式，该剪接形式在非肿瘤细胞中基本上不存在。该方法包括给予受试者有效量的至少一种多肽，其包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列，以产生针对肿瘤细胞的免疫应答。本专利技术还提供了一种鉴别本专利技术多肽的方法，所述多肽在受试者中诱导MHC-限制的细胞毒T淋巴细胞应答，包括获取外周血淋巴细胞(PBLs)，使PBLs暴露于一种或多种多肽以刺激PBL；将刺激过的PBLs与靶细胞共同孵育，靶细胞或者内源性地合成作为多肽来源的选择性剪接形式，或者用多肽脉冲处理过；以及检测靶细胞的裂解。例如，可以用放射性或荧光物质自体标记靶细胞，可以通过测定从被激活的PBLs裂解的靶细胞中释放的自体标记物的量实现对靶细胞裂解的检测。也可以通过酶联斑点免疫(“ELISPOT”)方法来检测靶细胞的裂解。本专利技术还提供了能够与选择性剪接形式上的特异性表位、或与包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列的多肽相结合的抗体。抗体可以是单克隆的或是多克隆的，或者可以是可以与一种选择性剪接形式的表位特异性结合的抗体片段。本专利技术还提供了一种能够产生单克隆抗体的杂交瘤，该单克隆抗体与选择性剪接形式、或与包含独特于选择性剪接形式的氨基酸序列的多肽特异性结合。本专利技术进一步提供了一种治疗患有、或具疾病或病况患病风险的受试者的方法，其中患病的或异常的细胞产生至少一种选择性剪接形式，该选择性剪接形式在正常细胞中基本上不存在。该方法包括给予受试者有效量的至少一种抗体，该抗体对独特于选择性剪接形式的氨基酸序列是特异性的，以使受试者的一个或多个临床症状得以改善，或者使受试者体内患病或异常的细胞数量减少。氨基酸缩写用于描述本专利技术中多肽化合物的命名法遵循传统习惯，其中氨基位于每个氨基酸残基的左侧而羧基位于右侧。在本专利技术中代表挑选的特殊具体实施方案的公式中，尽管没有特别地指出，氨基和羧基-末端的基团应被理解为它们在生理pH值下存在的形式，除非另外指明。在氨基酸结构式中，对应于该氨基酸的普通名称，每个残基通常用一个单字母或三字母名称表示，按见下表A 丙氨酸AlaC 半胱氨酸 CysD 天冬氨酸 AspE 谷氨酸GluF 苯丙氨酸 PheG 甘氨酸GlyH 组氨酸HisI 异亮氨酸 IleK 赖氨酸LysL 亮氨酸LeuM 甲硫氨酸 MetN 天冬酰胺 AsnP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有独特于选择性剪接形式的氨基酸序列的多肽。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾伯特J黄，
申请(专利权)人：托马斯杰斐逊大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]