甲氧基荧光素衍生物及其制备方法以及羧肽酶Y检测方法和检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及羧肽酶Y的检测领域，具体涉及甲氧基荧光素衍生物及其制备方法以及羧肽酶Y检测方法和检测试剂盒。公开了甲氧基荧光素衍生物及其制备方法，甲氧基荧光素衍生物具有式(1)的结构，R为C1‑C10的烷基或环烷基；方法包括：在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式(2)化合物与酰氯或酸酐中的一种接触。还公开了甲氧基荧光素衍生物在检测羧肽酶Y的活性中的应用及检测羧肽酶Y活性的方法。本发明专利技术的甲氧基荧光素衍生物用于与羧肽酶Y活性检测有关的应用时，灵敏度高、选择性好、荧光强度的变化大易于检测，稳定性更高、使用更方便、价格更低廉。

Methoxy fluorescein derivatives and their preparation methods and carboxypeptidase Y detection method and detection kit

The present invention relates to the detection field of carboxypeptidase Y, in particular to methoxy fluorescein derivative and its preparation method, and carboxypeptidase Y detection method and detection kit. Discloses methoxy fluorescein derivatives and preparation method thereof, methoxy fluorescein derivatives with formula (1) structure, R alkyl or cycloalkyl C1 C10; methods include: in the presence of nucleophilic reaction conditions and acid binding agent, in organic solvent, the type (2) a contact compounds with acyl chloride or anhydride. The application of methoxy fluorescein derivative in the detection of the activity of carboxypeptidase Y and the method for detecting the activity of carboxypeptidase Y were also disclosed. The methoxy fluorescein derivative is applied to the detection of carboxypeptidase Y activity. It has the advantages of high sensitivity, good selectivity, large change in fluorescence intensity, easy detection, high stability, convenient use and low price.

【技术实现步骤摘要】
甲氧基荧光素衍生物及其制备方法以及羧肽酶Y检测方法和检测试剂盒
本专利技术涉及羧肽酶Y的检测领域，具体地，涉及一种甲氧基荧光素衍生物及其制备方法以及羧肽酶Y检测方法和检测试剂盒。
技术介绍
羧肽酶Y(EC号：3.4.16.1)，可水解所有具有羧基末端的氨基酸，已成为蛋白多肽链C末端分析中常用工具酶。此外羧肽酶Y还可通过转肽反应使其它氨基酸衍生物或亲核物质取代肽链末端的氨基酸残基，从而形成新肽。目前测定羧肽酶Y活性的主要方法主要有紫外吸收光谱法，该方法所需要的底物结构简单，操作方便，目前已经获得广泛使用，但是紫外方法存在以下两方面的缺陷：首先，紫外吸收光谱法的背景干扰大导致分析的灵敏度低；其次，用于分析的底物多为肽类，该类底物合成难度大，成本较高。第二种常用的方法为荧光分光光谱法，该方法主要以多肽类荧光探针为底物，反应灵敏度高于紫外分光光谱法，但用于分析的多肽底物合成难度大，成本高，且在常规条件下大都稳定性差，存储和允许条件苛刻，原子利用率低。目前国内外还没有非肽类荧光探针用于检测羧肽酶Y的活性的报道。因此，设计开发基于非肽，廉价，操作简便且性质稳定的小分子探针来提高检测羧肽酶Y的灵敏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲氧基荧光素衍生物，该甲氧基荧光素衍生物具有式(1)所示的结构，其中，R为C1‑C10的烷基或环烷基；

【技术特征摘要】
1.一种甲氧基荧光素衍生物，该甲氧基荧光素衍生物具有式(1)所示的结构，其中，R为C1-C10的烷基或环烷基；2.根据权利要求1所述的甲氧基荧光素衍生物，其中，R为C2-C6的烷基；优选的，R选自乙基、丙基、丁基、戊基、己基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基中的一种；更优选的，R选自乙基、丙基、丁基和环己基中的一种，进一步优选的，R选自乙基、正丙基、异丙基、叔丁基和环己基中的一种。3.权利要求1或2所述的甲氧基荧光素衍生物的制备方法，该方法包括：在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式(2)所示结构化合物与酰氯或酸酐中的一种接触；其中，所述酰氯的通式为R’-C(＝O)Cl，R’与R具有相同的选择；所述酸酐的通式为R”-C(＝O)-O-(O＝C)-R”，R”与R具有相同的选择。4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，相对于1毫摩尔的式(2)所示结构化合物，所述酰氯或酸酐的用量为1-2毫摩尔，所述缚酸剂的用量为1-3毫摩尔，所述有机溶剂的用量为20-30毫升；优选的，所述缚酸剂选自三乙胺、二乙胺、二异丙基胺、吡啶、N,N-二甲氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨光富，杨文超，杨庶侯，伍磊，
申请(专利权)人：华中师范大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42