一种肿瘤抑制蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新的肿瘤抑制蛋白ＨＣＲＰ１，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。该肿瘤抑制蛋白ＨＣＲＰ１是利用定位候选克隆的方法克隆到。它定位在人染色体８ｐ２２上，ｃＤＮＡ全长为１９１７个核苷酸，编码３９７个氨基酸的蛋白质。将ＨＣＲＰ１导入肝癌细胞，能够抑制肝癌细胞的恶性转化能力。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及新的肿瘤抑制蛋白及编码该蛋白的多核苷酸。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。本专利技术的多肽是一种抑制肿瘤恶性增殖的肿瘤抑制蛋白。
技术介绍
恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病，成为造成人类死亡的第二大病因。据统计，我国死于恶性肿瘤的前五位癌症依次为胃癌、肝癌、肺癌、食管癌和大肠癌。肿瘤是一种细胞的异常增生。癌细胞可以不受控制地生长繁殖，侵犯邻近正常组织并转移到远处的组织器官。癌的发生是一个多因素，多阶段的复杂渐进的过程。正常细胞的癌变与其改变了的遗传特性有关。通常细胞内有两套基因。一类是参与细胞的生长代谢，促进与调节细胞繁殖和分化的，如原癌基因。另一类是正常细胞内能抑制细胞转化和肿瘤发生的，如肿瘤抑制基因或抑癌基因。两类基因的突变紊乱，包括点突变，DNA片段的缺失或移位等会使细胞无限增殖，使机体发生癌变。近年来外科手术，放疗和化疗构成肿瘤治疗的三大模式。这些治疗方法基于直接杀伤肿瘤细胞，常难彻底消灭肿瘤细胞，又易损伤正常组织，特别是伤害机体免疫系统，影响正常的细胞免疫。随着现代分子生物学和基因工程技术的发展，生物治疗已成为肿瘤治疗的第四模式。在通常情况下，肿瘤与机体防御之间存在动态平衡，平衡的失调导致肿瘤的增殖与播散。肿瘤的生物治疗指通过肿瘤宿主防御机制或生物制剂的作用以调节机体自身的生物学反应，从而抑制或消除肿瘤生长的治疗方法。例如利用肿瘤的抑癌基因治疗，通过借助于基因转移法恢复或添加肿瘤细胞中失活或缺乏的抑癌基因，恢复抑癌基因的功能，从而对肿瘤的恶性增殖或转移产生一定的抑制和治疗作用为了有效地治疗和预防肿瘤，本领域迫切需要开发研究肿瘤抑制蛋白及其激动剂/抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的肿瘤抑制蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种分离的肿瘤抑制蛋白，该蛋白选自下组(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有肿瘤抑制功能(如抑制肝癌细胞恶性增殖)的由(a)衍生的多肽。较佳地，所述的肿瘤抑制蛋白的序列如SEQ ID NO2所示。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码本专利技术上述的肿瘤抑制蛋白。较佳地，该多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO2。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组(c)SEQ ID NO1的全长序列，或(d)SEQ ID NO1中第151-1341位序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备肿瘤抑制蛋白的制备方法，该方法包含(a)在表达条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出肿瘤抑制蛋白。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的肿瘤抑制蛋白特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸，较佳地它含有连续的约15-1000个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的肿瘤抑制蛋白或编码本专利技术肿瘤抑制蛋白的多核苷酸，以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。本专利技术还提供了本专利技术蛋白和多核苷酸的用途，它们被用于制备治疗肿瘤(尤其是肝癌)的药物。在本专利技术的第七方面，提供了一种检测肝癌的方法，它包括步骤检测肝细胞样本中HCRP1转录本的数量，如果样本中HCRP1转录本的数量低于正常对照，就表明样本中存在肝癌细胞的几率大于正常组织。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、Northern杂交检测HCRP1的mRNA在人各组织中的表达。表明HCRP1基因在人正常肝组织中高量表达。图2、软琼脂克隆形成实验检测HCRP1抑制肝癌细胞的恶性增殖能力。图中(a)，稳定转染空载体pcDNA3的SMMC-7721细胞株作对照；(b)，稳定转染HCRP1基因的SMMC-7721细胞株克隆形成受抑制；(c)，稳定转染反义HCRP1 cDNA的SMMC-7721细胞株克隆形成能力明显增强。图3、裸鼠成瘤性实验检测HCRP1抑制肿瘤生长的能力。图中(a)，稳定转染空载体pcDNA3的SMMC-7721细胞株作为对照；(b)，稳定转染HCRP1基因的SMMC-7721细胞株成瘤性减弱；(c)，稳定转染反义HCRP1 cDNA的SMMC-7721细胞株的成瘤性明显增强。具体实施例方式本专利技术人利用定位候选克隆的方法分离到一个新的肿瘤抑制相关基因HCRP1。它位于人染色体8p22区域，这个区域在很多肿瘤中发生高频的杂合性缺失，是克隆抑癌基因的热点区域。全序列测定表明HCRP1cDNA全长为1917bp(SEQ ID NO1)，包含有一个完整的蛋白编码框(第151-1341位)，编码了一个由397个氨基酸组成的肿瘤抑制蛋白HCRP1(见SEQ ID NO2)。本专利技术还进行了HCRP1基因的组织表达分布实验，通过与8种正常人组织mRNA的Northern杂交实验，表明HCRP1在肝组织中表达量最高，在肺、脾、肌肉和睾丸中表达量中等，在脑、心、胃中微量表达或不表达。此外，软琼脂克隆形成实验表明，HCRP1高表达会抑制SMMC-7721细胞在软琼脂上的克隆形成。而且利用反义cDNA减弱HCRP1的表达促进了SMMC-7721细胞在软琼脂上的克隆形成。这证明了HCRP1具有抑制肝癌细胞恶性增殖的能力。在裸鼠中进行的成瘤性实验也表明，HCRP1具有的抑制肿瘤生长的作用。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的肿瘤抑制蛋白或多肽”或“分离的HCRP1”是指肿瘤抑制蛋白HCRP1基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化肿瘤抑制蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。如本文所用，“本专利技术多肽”指肿瘤抑制蛋白HCRP1或其具有抑制肿瘤功能的活性片段、衍生物和类似物。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括HCRP1的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的天然HCRP1相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的肿瘤抑制蛋白，其特征在于，选自下组：　　　　（ａ）具有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２氨基酸序列的多肽；　　　　（ｂ）将ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有肿瘤抑制功能的由（ａ）衍生的多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵慕钧，徐振华，梁亮，李载平，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]