体外转录生成短双链干扰RNA的方法技术

技术编号:1743332 阅读:297 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种体外转录生成短双链干扰RNA方法,用于生物、基因工程技术领域。首先设计合成T7启动子18bp及含目标基因20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链,两者退火后形成双链DNA,合成T7启动子18bp及含目标基因反向互补序列20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链,两者退火后以两条含T7启动子的目标基因和目标基因反向互补序列的双链DNA链为模板分别转录生成正链RNA和反链RNA,将两条转录后的产物用DNase-I降解反应体系中的DNA,获得正单链RNA和反单链RNA,将两个反应体系中生成的正、负单链RNA退火并纯化后便获得短双链RNA。本发明专利技术获得的短双链干扰RNA导入细胞的短双链干扰RNA没有引起非特异性免疫反应,本发明专利技术操作简单、成本低、效率高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种体外转录生成短双链干扰RNA的方法,其特征在于,首先设计合成T7启动子18bp及含目标基因20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链,两者退火后形成双链DNA,合成T7启动子18bp及含目标基因反向互补序列20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链,两者退火后还形成另一条双链DNA,T7RNA聚合酶在T7启动子引导下,以两条含T7启动子的目标基因和目标基因反向互补序列的双链DNA链为模板分别转录生成正链RNA和反链RNA,将两条转录后的产物 用DNase-I降解反应体系中的DNA,获得正单链RNA和反单链RNA,将两个反应体系中生成的正、负单链RNA退火并纯化后便获得短双链RNA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:潘玉春孟和陈学辉崔芳岩王启山
申请(专利权)人:上海交通大学
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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