【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种生物
的方法，特别是一种。
技术介绍
，通常是寻找高表达的启动子和调节序列。现有大量资料表明，将菜豆球蛋白C端的AFVY(Ala-Phe-Val-Tyr)液泡导向信号连在绿色荧光蛋白的末端，可以实现绿色荧光蛋白在液泡中的积累。将绿色荧光蛋白的末端加上KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu)短肽，绿色荧光蛋白能在细胞质的内质网中积累。 经对现有文献检索，尚未发现在不改变启动子和调节序列的前提下，仅仅在基因末端分别加上导向内质网和贮藏液泡的运输信号，再利用传统杂交育种的途径，提高外源蛋白在植物中累积的方法，也未发现与本专利技术相同技术主题的报导。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种提高外源蛋白在转基因植物种子中累积的方法。使其提高外源蛋白在转基因植物中的累积。构建两种含有内质网和液泡导向信号的组织特异性表达载体，分别转化植株，得到转基因后代，再将两种转基因植物后代杂交。将两种体系的优点整合到一起，从而达到提高外源蛋白在植物种子中积累的目标。 本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术包括如下...
【技术保护点】
一种提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法，其特征在于，包括如下步骤：①用限制性内切酶酶切ｐＣＡＭＢＩＡ２３００和ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ｈＧＭ－ＣＳＦ基因，补平，去磷酸化，将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因和酶切过的载体用Ｔ４连接酶连接，过夜，基因的末端有ＫＤＥＬ内质网导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；②用上述同样的方法构建另一种系列的表达载体，其特点是ｈＧＭ－ＣＳＦ基因的末端有ＡＦＶＹ贮藏液泡导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；③将这两种表达载体分别导入农杆菌ＧＶ３１０１和ＬＢＡ４４０４中，吸取适量农杆菌加入含有抗生素的ＹＥＰ培养基中，２８℃，...
【技术特征摘要】
1.一种提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法，其特征在于，包括如下步骤①用限制性内切酶酶切pCAMBIA2300和pCAMBIA3300质粒和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子hGM-CSF基因，补平，去磷酸化，将hGM-CSF基因和酶切过的载体用T4连接酶连接，过夜，基因的末端有KDEL内质网导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；②用上述同样的方法构建另一种系列的表达载体，其特点是hGM-CSF基因的末端有AFVY贮藏液泡导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；③将这两种表达载体分别导入农杆菌GV3101和LBA4404中，吸取适量农杆菌加入含有抗生素的YEP培养基中，28℃，250rpm培养36hr，当OD值达到0.8左右，开始用于转化拟南芥和大豆；④将这两种转基因植株的后代进行杂交，得到杂交的后代；⑤对后代和亲本进行蛋白定量分析。2.根据权利要求1所述的提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法，其特征是，在步骤①中，所述的去磷酸化，是指用碱性磷酸酶。3.根据权利要求1所述的提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法，...
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