一种重组人tPA的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种重组人ｔＰＡ的制备方法，包括了从工程菌株发酵生产，ｔＰＡ包涵体的提取、复性、纯化、浓缩，到ｔＰＡ产品的冷冻干粉制备等的全套生产工艺，其中重点解决了ｔＰＡ包涵体的复性、ｔＰＡ纯化等关键技术。利用本发明专利技术所提供的制备方法，从１０Ｌ发酵体积中可生产ｔＰＡ晶体湿重１０克以上，变性、复性后总活性可高达３－４×１０↑［８］ＩＵ，总的复性效率＞１０％，复性后有活性ｔＰＡ的回收率达到６０％，纯化后ｔＰＡ的纯度达９９％以上。本发明专利技术提供的ｔＰＡ制备方法具有产量高、操作简便、成本低廉、效率高的优点，所提供的生产工艺可很快转化为工业化生产工艺。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及，更具体涉及重组人tPA的发酵生产，以及发酵产品的变性、复性、纯化工艺技术。tPA是目前最有效、最安全的溶栓药物，广泛用于治疗血栓引起的各种疾病，尤其急性心肌梗塞病人和脑血栓病人的抢救治疗。本专利技术提供的技术可应用于tPA的工业化生产。
技术介绍
组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plasminogen activator，tPA)是一种重要的溶栓剂，其主要功能是切割纤溶酶原蛋白使其激活成为纤溶酶而使纤维蛋白溶解，从而达到溶栓的目的。tPA优先激活与血栓或不溶性纤维蛋白结合的纤溶酶原发挥溶血栓和溶纤作用，因此对血栓部位具有特异性，不易造成其它部位出血，与其它溶栓药物如链激酶、尿激酶相比有巨大优势，是目前最有效、最安全的溶栓药物，广泛用于治疗血栓引起的各种疾病，尤其急性心肌梗塞病人和脑血栓病人的抢救治疗。1987年，基因工程技术生产的tPA在美国批准上市，商业名为阿克伐司(Activase)，在上世纪90年代中期的临床观察中被确认是治疗心肌梗塞最有效的药物。目前，美国、英国、德国等先进国家的tPA商品都已换代为tPA衍生物产品(即对天本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人ｔＰＡ的制备方法，它包括下列步骤：Ａ、利用工程菌株ＢＬ２１／ｒｔＰＡｍ－１，进行发酵生产重组ｔＰＡ，工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｒｔＰＡｍ－１，ＣＣＴＣＣ　Ｍ２０５１１２，利用工程菌株ＢＬ２１／ｒｔＰＡｍ－１发酵生产重 组人ｔＰＡ包括步骤：首先是斜面种子培养；用ＬＢ培养基，３７℃培养１８－２０小时；其次是瓶摇种子制备：用２ＹＴ培养基，摇瓶培养，３７℃培养１２－１４小时；第三是发酵培养：用发酵培养基，３７℃进行发酵培养和诱导蛋白质表达；Ｂ、ｔＰＡ包涵 体的提取和纯化：离心收集菌体，超声波破碎菌体，离心去上清，沉淀用ｐＨ８．０的Ｔｒｉｓ－ＮａＣｌ－吐温...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶林柏，吴正辉，佘应龙，叶力，郜金荣，
申请(专利权)人：武汉大学，武汉陆地生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]