耐热化α－葡聚糖磷酸化酶（ＧＰ）的方法技术

通过修饰天然α－葡聚糖磷酸化酶获得的耐热化α－葡聚糖磷酸化酶；和制备所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶的方法。所述天然α－葡聚糖磷酸化酶来源于植物。与天然α－葡聚糖磷酸化酶比较，耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有不同的氨基酸残基：对应基序序列１Ｌ或１Ｈ的４－位的位置、对应基序序列２的４－位的位置和对应基序序列３Ｌ或３Ｈ的７－位的位置，并且在２０ｍＭ柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ６．７）中在６０℃加热１０分钟以后，所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在３７℃的酶活性是加热之前所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在３７℃的酶活性的２０％或更多。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及热稳定的α-葡聚糖磷酸化酶和编码所述热稳定α-葡聚糖磷酸化酶的基因。另外，本专利技术还涉及生产热稳定α-葡聚糖磷酸化酶的方法。
技术介绍
α-葡聚糖磷酸化酶(以下也称GP)是例如用于合成葡萄糖-1-磷酸(以下也称G-1-P)和合成葡聚糖的一种酶。G-1-P例如用作医用抗菌药、抗肿瘤药(作为铂络合物)、治疗心脏病的药物(作为胺盐)或葡聚糖合成的底物。GP广泛分布于植物，例如分布在马铃薯的块茎；动物，例如兔肌肉；和微生物如酵母中。其中，植物来源的GP是有用的，因为它通常具有合成高分子量葡聚糖的能力。多种GP可用于生产G-1-P或葡聚糖，其中，马铃薯来源的GP用于很多情况中，因为容易获得较大量的该酶。在使用GP工业生产G-1-P或葡聚糖中，有必要基本去除缘于GP污染的其它酶活性，尤其是磷酸酶活性和淀粉酶活性。当大量生产GP时，大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草杆菌(Bacillus subtilis)是表达GP基因的理想宿主。然而，如图4和图5所示，大肠杆菌具有淀粉酶活性和磷酸酶活性，而枯草杆菌具有淀粉酶活性。然而，如图4和图5所示，由这些宿主表达的酶不能本文档来自技高网...

【技术保护点】
耐热化α－葡聚糖磷酸化酶，其通过修饰天然α－葡聚糖磷酸化酶获得，其中所述天然α－葡聚糖磷酸化酶来源于植物，并且所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶选自下组的至少一个位置具有与所述天然α－葡聚糖磷酸化酶不同的氨基酸残基：对应基序序列１Ｌ：Ｈ－Ａ－Ｅ－Ｆ－Ｔ－Ｐ－Ｖ－Ｆ－Ｓ中第４位的位置或对应基序序列１Ｈ：Ｈ－Ａ－Ｏ－Ｙ－Ｓ－Ｐ－Ｈ－Ｆ－Ｓ中第４位的位置；对应基序序列２：Ａ－Ｌ－Ｇ－Ｎ－Ｇ－Ｇ－Ｌ－Ｇ中第４位的位置；和对应基序序列３Ｌ：Ｒ－Ｉ－Ｖ－Ｋ－Ｆ－Ｉ－Ｔ－Ｄ－Ｖ中第７位的位置或对应基序序列３Ｈ：Ｒ－Ｉ－Ｖ－Ｋ－Ｌ－Ｖ－Ｎ－Ｄ－Ｖ中第７位的位置；并且其中在２０ｍＭ柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ６．７）中６０℃...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳濑美千代，高田洋树，藤井和俊，鹰羽武史，栗木隆，
申请(专利权)人：江崎格力高株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[]