一种PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种具有较高特异性，并且操作简单的ＰＣＲ方法。该ＰＣＲ方法，通过模板变性、ＳｉｔｅＦｉｎｄｅｒ在低温下与基因组模板退火、单方向延伸，将ＳｉｔｅＦｉｎｄｅｒ序列引入基因组序列之中；通过２轮ＰＣＲ指数倍扩增目标ＤＮＡ分子，而非目标分子因茎环结构的抑制作用而无法完成指数扩增，从而达到选择性扩增目标分子的目的；通过限制性内切酶识别位点选择性地克隆目标分子；最后，通过已知序列上ＧＳＰ２下游的ＧＳＰ３特异性的筛选目标分子。本发明专利技术的ＰＣＲ方法与现有ＰＣＲ方法相比，具有简单快速、特异性高、通用性强、重复性好、一次扩增片段较长且成本低廉等优点，广泛适用于分子生物学研究中多种目的染色体步查，如转基因动、植物及微生物中外源基因插入位点的鉴定、基因未知区段新基因的分离等。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＰＣＲ方法，包括以下步骤：１）用ＳｉｔｅＦｉｎｄｅｒ起始ＰＣＲ反应；所述ＳｉｔｅＦｉｎｄｅｒ包括４↑［６］种单链寡聚脱氧核苷酸分子，所述各种单链寡聚脱氧核苷酸分子的长度相同，均为５０－１００ｎｔ；所述各种单链寡聚脱氧核苷 酸分子的３′末端的４至６个脱氧核苷酸组成的序列均相同，紧密连接于该４至６个脱氧核苷酸的５′方向的６个脱氧核苷酸组成的序列均不同，紧密连接于该６个脱氧核苷酸的５′方向的３８－９０个脱氧核苷酸组成的序列均相同；２）进行巢式ＰＣＲ反应；　 　所述巢式ＰＣＲ反应的引物由根据ＳｉｔｅＦｉｎｄｅｒ合成的ＳＰＦ１和ＳＰＦ２，和根据与待扩增的目...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：安成才，谭桂红，高音，石苗，张欣跃，何善平，陈章良，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]