A Legumain response step by step release doxorubicin / curcumin sustained-release nano preparation method and the application of the high expression of the biological characteristics of Legumain in tumor tissue, preparation of nano gel Legumain response, in order to achieve the dual target of tumor tissue to effect (active targeting and passive targeting), reduce adriamycin on normal tissue secondary damage, nanoparticles prepared by the invention can make the drug and inhibitor release function, after entering the cell, the first release from the carrier inhibitor, occupy resistance protein active sites, and the drug release, so as to minimize the efflux of drugs, the reversal of multidrug resistance.
【技术实现步骤摘要】
一种Legumain响应分步释放阿霉素/姜黄素缓释的纳米制剂的制备方法及应用
本专利技术涉及纳米药物
,具体涉及一种Legumain响应分步释放阿霉素/姜黄素缓释的纳米制剂的制备方法及应用。
技术介绍
产生副作用和肿瘤组织产生多耐药性是化学药物治疗失败的两大因素。阿霉素是一种常用的光谱抗肿瘤化学药物,然而,阿霉素作为一种强细胞毒性药物,对正常组织(如心脏、肝、肾以及肿瘤周围正常组织等)带来不可逆转的伤害。如何实现药物靶向肿瘤组织,减少对正常组织的次生伤害,是恶性肿瘤药物治疗中的一大难点。由于恶性肿瘤组织具有“渗透和滞留增强效应”,纳米尺度下的药物-载体体系能够透过肿瘤组织的新生血管壁而不能透过正常组织的血管壁,达到“被动靶向”肿瘤组织效果,增强药物在肿瘤组织的聚集,从而减少对正常组织的伤害。然而,大量的研究表明这种仅仅依靠“被动靶向”效应,在实践中往往很难达到实际需要的靶向效率。利用肿瘤组织自身及其微环境的生物学特性(如低PH值,高还原势,过表达叶酸受体等),制备环境因子响应型纳米药物载体,达到对肿瘤组织“主动”和“被动”双重或多重靶向效应,能够极大提高药物在肿瘤组织中的聚集,从而提高药物治疗的效果。Legumain是哺乳动物中唯一的特异性水解天冬酰胺残基的酶,研究表明Legumain在许多恶性肿瘤及肿瘤相关细胞中高表达,可作为恶性肿瘤药物靶向设计的新靶点。以往利用肿瘤组织高表达Legumain蛋白酶特性的药物缓释体系包括将药物与Legumain底物肽段直接相连,并在肽段另一端连接细胞膜不透性因子,从而使药物只能Legumain高活性的肿瘤组织中才能 ...
【技术保护点】
一种Legumain响应分步释放阿霉素/姜黄素缓释的纳米制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)阿霉素的多肽衍生物合成:A、称取阿霉素盐酸溶液(Dox·HCl) 1mmol和磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)溶于50ml的DMF,加入N,N‑二异丙基乙胺(DIPEA)2mmol,磁力搅拌,加入HATU溶液,室温避光搅拌,然后将反应置于‑20±5℃条件下使反应停止,透析袋内透析,产物冷冻干燥,得到DOX‑PEP‑NH‑Fmoc产物;B、将A步骤中得到的产物加二氯甲烷溶解,加入20% 哌啶室温搅拌5±1 min,迅速置于冷却液中,加丁二酸酐,待颜色变化后放置于室温反应10 ±1min,40 ℃旋干,加乙醚, 10000 r/min离心10±1min,去除DOX‑PEP‑NH‑Fmoc产物的Fmoc保护基团,调节PH值至6.95±0.5,并用透析袋内透析去除小分子副产物,冷冻干燥,制备得到DOX‑PEP‑CONH‑CH2‑CH2‑COOH;(2)壳聚糖(CS)阿霉素多肽衍生物纳米粒子制备:a、称取DOX‑PEP‑CONH‑CH2‑CH2‑COOH溶于DMF中,超声5±1min,加入EDC和D ...
【技术特征摘要】
2017.03.22 CN 201710173410X1.一种Legumain响应分步释放阿霉素/姜黄素缓释的纳米制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)阿霉素的多肽衍生物合成:A、称取阿霉素盐酸溶液(Dox·HCl)1mmol和磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)溶于50ml的DMF,加入N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)2mmol,磁力搅拌,加入HATU溶液,室温避光搅拌,然后将反应置于-20±5℃条件下使反应停止,透析袋内透析,产物冷冻干燥,得到DOX-PEP-NH-Fmoc产物;B、将A步骤中得到的产物加二氯甲烷溶解,加入20%哌啶室温搅拌5±1min,迅速置于冷却液中,加丁二酸酐,待颜色变化后放置于室温反应10±1min,40℃旋干,加乙醚,10000r/min离心10±1min,去除DOX-PEP-NH-Fmoc产物的Fmoc保护基团,调节PH值至6.95±0.5,并用透析袋内透析去除小分子副产物,冷冻干燥,制备得到DOX-PEP-CONH-CH2-CH2-COOH;(2)壳聚糖(CS)阿霉素多肽衍生物纳米粒子制备:a、称取DOX-PEP-CONH-CH2-CH2-COOH溶于DMF中,超声5±1min,加入EDC和DMAP,震荡混匀,超声10±1min,将混合溶液在磁力搅拌下逐渐滴加到含CS的MES溶液中,常温过夜反应,用透析袋透析,干燥称量得到DOX-PEP-CS;b、取DOX-PEP-CS溶于1%醋酸中,超声,加入环己烷,正辛醇和TritonX100混合,用高速匀质机操作5±1min,静置,加入京尼平溶液,继续超声10±1min,反应2...
【专利技术属性】
技术研发人员:南开辉,林森,谢佩玲,罗梦梦,李彤,
申请(专利权)人:温州医科大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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