一种自组装聚HRP探针、制备方法、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种自组装聚HRP探针、制备方法、试剂盒及其应用。本发明专利技术自组装聚HRP探针分子链中含有多个HRP，具有双重信号放大功能，设计能够与目标物和自组装聚HRP探针结合的辅助探针，采用化学发光的原理对多种物质进行检测，如蛋白质、DNA、RNA等。同时本发明专利技术将磁分离技术、自组装聚HRP探针的双重信号放大功能和化学发光检测技术相结合，建立了一种灵敏度高、特异性强、操作简便的方法并成功应用于血清中循环miR‑142‑3p的检测。对于血清中miR‑142‑3p检测结果表明T‑ALL患者(n＝7)与健康人(n＝7)之间响应信号的差别具有统计学意义(P<0.05)。

A self-assembled poly HRP probe, preparation method, kit and its application

The invention relates to the field of molecular biology technology, in particular to a self-assembled poly HRP probe, preparation method, kit and its application. The self-assembly of poly HRP probe molecular chain with multiple HRP, dual signal amplification, and can design the object and the self-assembly of poly HRP probe with the auxiliary probe, using the principle of chemiluminescence detection of various substances, such as protein, DNA, RNA etc.. At the same time, the magnetic separation technique, self-assembly of poly HRP dual signal amplification probe and chemiluminescence detection technology, detection of a high sensitivity, strong specificity, simple operation method and successfully applied in serum circulating miR 142 3p. The serum miR 142 3P test results show that the T ALL patients (n = 7) and healthy controls (n = 7) between the response signal was statistically significant difference (P< 0.05).

【技术实现步骤摘要】
一种自组装聚HRP探针、制备方法、试剂盒及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种自组装聚HRP探针、制备方法、试剂盒及其应用。
技术介绍
目前对于蛋白质、DNA、RNA等的检测方式多种多样，基于化学发光检测的分析方法是其中一种，化学发光检测通常是通过催化发光底物发生反应产生检测信号，通过测定产生的化学发光信号大小确定待测物质的含量，其中辣根过氧化物酶(HRP)特有的催化性能，常被用作含有双氧水的发光底物的化学发光分析检测过程中，但是现有市售的HRP在用于含量较低的目标物的检测过程中会存在催化性能有限，不能高灵敏性的、高准确性的检测出目标物的缺陷，例如对于一些微小RNA的的检测。微小RNA，又称microRNA、miRNA，是由19-25个核苷酸组成的非编码单链RNA，它具有高度保守性、发育时序性和器官组织特异性。成熟的miRNA可被装配整合到RNA诱导的基因沉默复合体(RISC)中，进而引起靶mRNA降解或翻译抑制。通过上述转录后水平调控的方式，miRNA参与调控人体中超过1/3的基因，在细胞分裂、分化、凋亡、迁移和新陈代谢等多种生命活动中起到了重要的作用。越来越多的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种自组装聚HRP探针，其特征在于，由两种DNA探针杂交而成，其中一种为标记辣根过氧化物酶的DNA探针，记为杂交探针1，其核苷酸序列为：5'‑HRP‑AAAAAAAAAATACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGT‑3'；另一种DNA探针记为杂交探针2，其核苷酸序列为：5'‑GCACCTGGGGGAGTAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG‑3'。

【技术特征摘要】
1.一种自组装聚HRP探针，其特征在于，由两种DNA探针杂交而成，其中一种为标记辣根过氧化物酶的DNA探针，记为杂交探针1，其核苷酸序列为：5'-HRP-AAAAAAAAAATACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGT-3'；另一种DNA探针记为杂交探针2，其核苷酸序列为：5'-GCACCTGGGGGAGTAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'。2.一种如权利要求1所述的自组装聚HRP探针的制备方法，其特征在于，取杂交探针1和杂交探针2，在室温环境下涡旋杂交，即完成。3.一种试剂盒，其特征在于，包括用于捕获目标物的捕获探针、辅助探针和如权利要求1所述的自组装聚HRP探针；其中辅助探针的核苷酸序列从5'端到3'端包括与目标物特异性结合的序列1、与自组装聚HRP探针互补结合的序列2。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括目标物捕获载体、化学发光板、洗涤液、杂交缓冲液、化学发光底液。5.一种如权利要求3或4所述的试剂盒的应用，其特征在于，应用于检测RNA、DNA和蛋白质。6.如权利要求5所述的试剂盒的应用，其特征在于，应用于检测miR-142-3p。7.如权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于，所述捕获探针的核苷酸序列为5'-AAAAAAAAAATCCATAAAGTAG-3'；辅助探针的核苷酸序列为5'-GAAACACTACAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'。8.如权利要求6或7所述的试剂盒的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：何磊良，丁丽华，吴拥军，刘利娥，玉崧成，于斐，田咏梅，吴予明，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41