从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法。该方法包括：１）用超高压均质法破碎亚油酸异构酶产生菌的菌体细胞，得到均质液，将该均质液进行离心，收集含有蛋白质的上清液得到粗酶液；２）进行（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］饱和度为６０－９０％的（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］分级沉淀，收集沉淀，用磷酸钾缓冲液悬浮，得到粗酶液；３）将粗酶液进行进行离子交换层析；所述离子交换层析采用ｐＨ为５．５－７．０、摩尔浓度为０．１－０．７ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液进行线性洗脱将酶液进行凝胶过滤层析，收集具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液；４）用摩尔浓度为０．０８－０．１５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ为５．５－７．０的磷酸钾缓冲液进行透析脱盐；５）进行凝胶过滤层析，所述凝胶过滤层析中采用的洗脱液为摩尔浓度为０．０８－０．１５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ为５．５－７．０的磷酸钾缓冲液得到亚油酸异构酶。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法，包括以下步骤：１）用超高压均质法破碎亚油酸异构酶产生菌的菌体细胞，得到均质液，将该均质液进行离心，收集含有蛋白质的上清液得到粗酶液；所述超高压均质法的均质工作压力为１３０－１６０ＭＰａ，均质阀片直径为０．０５－０．１５ｍｍ；２）将步骤１）得到的粗酶液进行（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］饱和度为４０－９０％的（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］分级沉淀，收集沉淀，用磷酸钾缓冲液悬浮，得到酶液；所述磷酸钾缓冲液的摩尔浓度为０．０８－０．１５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ为５．５－７．０；３）将步骤２）得到的酶液进行离子交换层析，所述离子交换层析采用ｐＨ为５．５－７．０、摩尔浓度为０．１－０．７ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液进行线性洗脱，收集具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液；４）将步骤３）得到的具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液用摩尔浓度为０．０８－０．１５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ为５．５－７．０的磷酸钾缓冲液进行透析脱盐；５）将经过步骤４）透析的酶液凝胶过滤层析；所述凝胶过滤层析中采用的洗脱液为摩尔浓度为０．０８－０．１５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ为５．５－７．０的磷酸钾缓冲液，得到亚油酸异构酶。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕加平，王丽敏，任星环，江均平，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]