The present invention relates to alpha amylase variants. The invention also relates to polynucleotides encoding these variants, including nucleic acid constructs, vectors and host cells including these polynucleotides, and methods of using these variants.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸对序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表,将其通过引用结合在此。专利技术背景
本专利技术涉及α-淀粉酶变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及使用这些变体的方法。
技术介绍
α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1)是通过切割内部α-1,4-糖苷键来水解淀粉、糖原和其他相关多糖的一组酶。多年来它一直用于例如衣物洗涤,其中熟知的是α-淀粉酶在去除含淀粉或基于淀粉的污渍中具有有益的效果。然而,在其他商业应用中,该酶已经变得重要,例如在淀粉加工的初始阶段(液化)中、在纺织品退浆中、在酒精生产中和作为洗涤剂组合物中的清洁剂。近年来,希望改进各种淀粉酶的特性。具体而言,当提及家庭护理业时,主要关注降低衣物洗涤温度以便降低能量消耗的目的。因此,已经为寻求改进的α-淀粉酶变体做了很多努力。无论如何,仍然需要具有改变的特性,并在各种工业应用中提供改进的性能的α-淀粉酶变体。因此,本专利技术提供了与其亲本相比具有改进特性的这种进一步改进的α-淀粉酶变体。
技术实现思路
本专利技术涉及具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的α-淀粉酶变体,其中该变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式,并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37 ...
【技术保护点】
一种具有α‑淀粉酶活性的亲本α‑淀粉酶的α‑淀粉酶变体,其中所述变体是具有淀粉酶活性的α‑淀粉酶的成熟形式,并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.08 IN 2336/CHE/20151.一种具有α-淀粉酶活性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式,并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482;其中这些位置对应于SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置;并且其中在该一个或多个位置处的取代提供α-淀粉酶变体,该α-淀粉酶变体针对稳定性的量度具有>1.0的改进因子,和/或针对比活性的量度具有≥1.0的改进因子。2.根据权利要求1所述的α-淀粉酶变体,其中所述亲本α-淀粉酶与SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列具有至少65%,例如至少70%、例如至少75%、例如至少80%、例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如97%、例如至少98%的序列一致性。3.根据前述权利要求中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、L34、K35、N36、A37、I39、T40、A41、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、E84、L85、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、R219、V222、W223、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、R254、G255、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、N296、L297、Q299、A300、S301、S303、S304、G305、N306、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、L357、T358、Q361、G362、Y363、Q365、V366、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、F405、D406、H407、W408、V410、T414、R415、E416、N418、A419、H421、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、W439、M440、V442、R444、Q445、A447、G448、H452、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、N465、D467、W469、H471、F473、N475、G477、以及V481;其中这些位置对应于SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置,该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。4.根据前述权利要求中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、G4、T5、G7、Q11、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、N25、R26、N29、N30、A31、Q32、L34、A41、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、V56、G59、A60、Y61、Y64、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、R87、I89、R90、S91、L92、K93、N95、Q98、V99、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、V191、T193、E194、N197、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、D209、H210、P211、E212、N215、L217、R219、W223、N226、V238、I241、K242、F245、G258、K259、N260、F262、A263、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、K281、W284、T285、S287、P292、N296、L297、Q299、S301、N306、L312、G315、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、G346、F348、K349、P350、L351、Q361、G362、Y363、Y368、G369、D370、Y372、G373、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、Q384、D387、Q394、Q395、A397、R400、H402、H407、W408、V410、R415、N418、H421、S431、G435、G436、W439、M440、Q445、A447、M454、G456、N465、D467、N475、G477、以及V481;其中这些位置对应于SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置,该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.4的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。5.根据前述权利要求中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、G7、F13、E14、W15、N16、N19、D20、Q22、R26、N29、N30、A31、Q32、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、G59、A60、Y64、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、K78、R90、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、R116、V117、A119、E121、N123、N126、R127、N128、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、F155、K156、R158、W159、Y160、D163、G164、T165、D166、W167、S170、R171、Q172、L173、R176、Y178、K179、R181、K185、A186、W187、D188、W189、V191、E194、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、H210、N215、L217、R219、W223、V238、K242、F245、G258、F262、K269、N270、A274、T285、S287、N296、L312、V318、H321、P322、A325、G337、E341、S342、K349、P350、Q361、G362、Y368、G369、D377、S381、Q384、D387、R400、W408、R415、N418、G435、Q445、M454、G477、以及V481;其中这些位置对应于SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置,该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.6的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。6.根据权利要求1和2中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、E276、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、V326、T327、V329、N331、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、D403、F405、D406、H407、W408、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、S424、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482;其中这些位置对应于如在SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置,并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。7.根据权利要求1和2中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、H2、D3、T5、G7、I9、E14、W15、N16、V17、Q22、H23、W24、N25、R26、H28、N29、N33、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、I44、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、L63、E68、G73、T74、V75、R76、T81、A83、E86、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V120、V122、N123、P124、N126、N128、Q129、V131、G133、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、F155、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、K179、R181、K185、A186、T193、N195、G196、Y198、Y203、D205、V206、D209、H210、E212、V213、I214、N215、L217、N218、W220、G221、W223、N226、T227、L228、D231、F233、V238、H240、K242、S244、R247、D248、L250、G251、H252、T257、G258、K259、N260、L261、K269、L272、G273、L275、E276、N277、L279、K281、T285、M286、A288、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Q299、A300、N302、S303、S304、G305、N306、R310、N311、L312、L313、G315、T316、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E341、S342、V344、G346、W347、F348、P350、L351、A354、T355、T358、E360、Q361、Y363、Q365、F367、Y368、G369、G373、I374、P375、S376、D377、V379、S381、Y382、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、D409、V410、R415、E416、N418、A419、S420、P422、S424、G425、L426、A427、M430、S431、D432、G435、W439、Y441、Q445、K446、A447、V450、H452、M454、G456、S459、F473、以及N475;其中这些位置对应于SEQIDNO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置,该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。8.根据权利要求1、2和6中任一项所述的变体,该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代,该组由以下各项组成:H1、D3、G7、N16、V17、Q22、H28、N33、N36、T40、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、V75、R76、N95、V99、G109、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V122、N123、P124、N126、N128、V131、Q136、I137、E138、A139、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、A174、R176、R181、K185、A186、T193、N195、Y203、D205、V206、D209、E212、V213、N215、N218、W220、G221、N226、F233、K242、D248、L250、G251、H252、G258、N260、K269、G273、E276、N277、T285、P292、L293、H294、N296、Q299、S304、G305、N306、R310、N311、L312、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E...
【专利技术属性】
技术研发人员:C安德森,V斯里瓦斯塔瓦,P巴卢穆里,PP查克拉巴尔蒂,S达拉尔,
申请(专利权)人:诺维信公司,
类型:发明
国别省市:丹麦,DK
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