一种罗非鱼鱼皮多肽螯合锌盐的制备方法，以罗非鱼鱼皮为原料，采用酶法制备鱼皮多肽（ＴＳＰ－Ⅰ），将鱼皮多肽液和硫酸锌以水浴加热法制备罗非鱼鱼皮多肽螯合锌盐。两者螯合反应的条件是：以ＴＳＰ－Ⅰ溶液中多肽含量为指标，按其与硫酸锌质量比为３∶１，螯合温度为６０℃，反应ｐＨ值为６．０，反应时间为０．５ｈｒ。本发明专利技术的积极效果：解决了罗非鱼下脚料的资源浪费问题，提供了一种高效的补锌制剂制法，所制得的鱼皮多肽螯合锌盐是一种受大家青睐的天然保健功能产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
锌是动物的必需微量元素，由于在体内广泛的生理生化功能而被称为"生命元素"。锌在人体内的生物学功能主要表现在以下几方面(1) 参加人体内许多金属酶的组成锌是机体中200多种酶的组成部分，六大酶类(氧化还原酶类、转移 酶类、水解醉类、裂解醉类、异构酶类和合成酶类)中均有含锌酶；许多酶 必须在有锌存在的条件下才有活性并可达到最大酶活；同时，锌还可维持 某些酶的有机分子配位基的结构构型并在酶反应时起到辅酶作用。(2) 促进机体的生长发育和组织再生锌是调节基因表达的DNA聚合酶的必需组成部分。锌对动物的生长、 分裂和分化、蛋白质和核酸的合成、DNA和RNA代谢等作用都是必需的。(3) 维持膜结构的完整性锌可以和膜蛋白上的疏基、磷脂的磷酸基等结合，以增加膜的稳定性。 当过氧化损伤时，膜内的-SH被氧化成二硫键，锌可以与硫形成稳定的硫醇 盐，防止被氧化而保护了膜的完整性。(4) 参与体内多种生理生化活动 锌参与维生素A还原酶和视黄醇结合蛋白的合成，对维持人的视力正常有重要作用；锌可以促进脑蛋白质和核酸的合成，对脑的正常发育和细胞 膜的稳定起重要的作用；锌促进性器官和性机能的正常发育；锌还可以保 护皮肤健康及参加免疫反应过程等。目前，锌缺乏是我国及许多发展中国家的急待解决的公共卫生问题， 我国大部分少年儿童、孕妇及病人都不同程度地存在着营养性锌缺乏。为 了改善这些人群的锌营养状况，人们开发了多种锌补剂。第一代锌补剂是硫酸锌等无机补剂，结构简单，价格低廉，但其与胃 酸反应生成的氯化锌是毒性较强的腐蚀剂，服后常伴有胃肠刺激等副作用; 另外，无机补剂的生物学效价较低。第二代锌补剂是有机补剂，如葡萄糖酸锌、乳酸锌等。其性能优于 第一代锌补剂，但吸收利用不及第三代锌补剂。第三代锌补剂是氨基酸螯合锌补剂和多肽螯合锌补剂，这种鳌合锌的 吸收是通过氨基酸(小肽)吸收途径，具有易吸收、向体外排泄率低、稳定 性好、毒性小、生物学利用率高等特点，是目前研究开发的补锌热点。我国是世界最大的罗非鱼生产国，年产量约占世界年产总量的一半。 随着鲜鱼片、冻鱼片和条冻鱼出口量的逐年攀升，产生了大量鱼皮、鱼骨、 鱼头等下脚料。这些下脚料若不加以有效的利用，不仅会造成极大的浪费， 还会造成环境污染。为了解决罗非鱼下脚料的资源浪费及提供一种高效的补锌制剂等问 题，结合鱼皮高蛋白的特点和前人的研究，我们尝试着采用酶法制备鱼皮 蛋白酶解物，将鱼皮蛋白酶解液和硫酸锌以水浴加热法制备罗非鱼鱼皮多 肽螯合锌盐。鱼皮多肽螯合锌盐，是一种受人青睐的天然保健功能食品， 同时也是一种很好的食品辅料和食品添加剂，可用于饮料、保健食品等领 域，增加人体蛋白吸收的同时达到补锌的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种鱼皮多肽螯合锌盐的制备方法，以克服传统 补锌制剂产生副作用及不易吸收的不足。本专利技术是这样来实现的，其方法步骤如下1、 预处理:清洗后的鱼皮经脱脂后，依次用0.1mol/L的盐酸溶液和 0. lmol/L的氢氧化钠溶液浸泡lhr。2、 水提预处理后的鱼皮经洗涤至中性后，在45'C条件下，用10倍体 积的蒸馏水恒温匀浆12hr后，抽滤提取上清液。3、 酶解在一定条件下，采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，比较两种酶的酶解效果，并确定最佳酶解条件。最佳酶解条件温度50°C-55°C， pH值6.0，时间2hr，加酶量0.05%，在此酶解条件下的水解度为12.3%。4、 灭酶采用100。C， 20min灭酶。5、 脱苦、脱色、脱味分别采用活性炭和复合脱色剂对酶解液进行脱苦、脱色、脱味处理，比较两种方法的效果。6、 过滤酶解液经脱苦、脱色、脱味处理后，再经4000r/rain离心过 滤获得清液。7、 离子交换取一定体积的超滤液在常温下以8倍柱体积/h的流速通 过001* 7 (732)强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，收集流出液，测定其氮 回收率，再将脱阳离子后的水解液以8倍柱体积/h的流速通过20W7 (717) 强碱性I型阴离子交换树脂，收集流出液，测定其氮回收率及脱盐率。8、 浓縮:使用旋转蒸发仪，浓縮温度为5(TC，蒸发溶液至粘稠状。9、 螯合以鱼皮蛋白酶解液中多肽含量为指标，按其与硫酸锌的质量 比3: 1， pH值为6，水浴恒温60。C，磁力搅拌0.5-lhr，所得溶液经过多次 无水乙醇洗涤，析出黄色粘稠状鱼皮多肽螯含锌盐，硫酸锌螯合率为83. 2%， 螯合物得率为22. 5%。10、 测定螯合率(1) 准确移取螯合锌浓縮液10mL于100mL容量瓶中，定容，摇匀。用EDTA络合滴定法测定微量元素的总量。(2) 另移取螯合锌浓縮液10mL于100mL烧杯中，继续加热浓縮至近干。 加入50mL无水乙醇，水浴温热(略低于体温)充分搅拌后，离心分离，将沉淀 用水溶解,转移至100mL容量瓶中，定容，摇匀。用EDTA络合滴定法测定螯合态微量元素的含量。 EDTA络合滴定准确移取25mL试液于250mL锥形瓶中，加入50mL水，滴加2—3滴二甲酚 橙作指示剂，用O. 02mol/L EDTA标准溶液滴定，溶液颜色由紫红变为亮黄色 即为滴定终点。螯合率(%)=(螯合态微量元素的含量/微量元素的总量)X100=(cvycv。) xioo = (vyv。)xi00C-EDTA溶液的浓度，mol/L;Vr滴定螯合态微量元素所消耗的EDTA溶液体积，mL; V。-滴定微量元素的总量所消耗的EDTA溶液体积，mL。11、 醇洗螯合物用无水乙醇洗涤2-3次。12、 烘干醇洗后螯合物于电热恒温鼓风干燥箱中恒温8(TC干燥30min 即得产品。13、测定螯合物得率多肽螯合锌盐的得率(％) =wyw。xiooW1:多肽螯合锌盐总重量(g);W。反应物总重量(g)。本专利技术的积极效果解决了罗非鱼下脚料的资源浪费问题，提供一种 高度的补锌制法，所制得的鱼皮多肽螯合锌盐是一种受大家青睐的天然保 健功能产品。具体实施方式 下面结合实例对本专利技术作进一步详细说明。 实施案例-称取100. 0008g冲洗干净的罗非鱼鱼皮，脱脂处理后依次用700ml的 0. lmol/L的盐酸溶液和0. lmol/L的氢氧化钠溶液浸泡lhr，蒸馏水洗涤至 中性后，在45。C条件下，用1000ml的蒸馏水恒温匀浆12hr，抽滤提取上清 液，升温至50°C-55°C，调节pH值为6. 0的条件下加入O. 04671g木瓜蛋白酶 酶解2hr，然后在10(TC高温条件下水浴加热20min，终止酶解反应，得到鱼 皮蛋白酶解液即TSP-I溶液，罗非鱼鱼皮蛋白水解度为12. 3%。采用复合脱色剂(3g/L的活性炭酵母和环糊精等混合而成)对酶解液进 行脱苦、脱色、脱味处理，4000r/min离心过滤收集上清液。常温下以8倍 柱体积/h的流速通过001*7(732)阳离子交换树脂，收集流出液，测得其 氮回收率为95. 40%,再将脱阳离子后的水解液以8倍柱体积/h的流速通过 201*7 (717)阴离子交换树脂，收集流出液，测得其氮回收率为93.31%及脱 盐率为93. 15%。按鱼皮蛋白酶解液中多肽质量与硫酸锌的质量比3: 1，调节反应pH值 为6. 0，水浴恒温60°C ，磁力搅拌0. 5-lhr得到螯合本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种罗非鱼鱼皮多肽螯合锌盐的制备方法，它是以罗非鱼鱼皮为原料，采用酶法制备鱼皮蛋白酶解液，将鱼皮蛋白酶解液和硫酸锌以水浴加热法制备鱼皮多肽螯合锌盐，其特征在于方法步骤如下： （１）预处理：清洗后的鱼皮经脱脂后，依次用０．１ｍｏｌ／Ｌ的盐酸溶液和０．１ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液浸泡１ｈｒ； （２）水提：预处理后的鱼皮经洗涤至中性后，在４５℃条件下，用１０倍体积的蒸馏水恒温匀浆１２ｈｒ后，抽滤提取上清液； （３）酶解：在一定条件下，采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，比较两种酶的酶解效果，并确定最佳酶解条件，最佳酶解条件：温度：５０℃－５５℃，ｐＨ值：６．０，时间：２ｈｒ，加酶量：０．０５％，在此酶解条件下的水解度为：１２．３％； （４）灭酶：采用１００℃，２０ｍｉｎ灭酶； （５）脱苦、脱色、脱味：分别采用活性炭和复合脱色剂对酶解液进行脱苦、脱色、脱味处理，比较两种方法的效果； （６）过滤：酶解液经脱苦、脱色、脱味处理后，再经４０００ｒ／ｍｉｎ离心过滤获得清液； （７）离子交换：取一定体积的超滤液在常温下以８倍柱体积／ｈ的流速通过００１＊７（７３２）强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，收集流出液，测定其氮回收率，再将脱阳离子后的水解液以８倍柱体积／ｈ的流速通过２０１＊７（７１７）强碱性Ⅰ型阴离子交换树脂，收集流出液，测定其氮回收率及脱盐率； （８）浓缩：使用旋转蒸发仪，浓缩温度为５０℃，蒸发溶液至粘稠状； （９）螯合：以鱼皮蛋白酶解液中多肽含量为指标，其与硫酸锌的质量比为３∶１，ｐＨ值为６，水浴恒温６０℃，磁力搅拌０．５－１ｈｒ，所得溶液经过多次无水乙醇洗涤，析出黄色粘稠状鱼皮多肽螯含锌盐，硫酸锌的螯合率为８３．２％，螯合物得率为２２．５％； （１０）醇洗：螯合物用无水乙醇洗涤２－３次； （１１）烘干：醇洗后螯合物于电热恒温鼓风干燥箱中恒温８０℃干燥３０ｍｉｎ即得产品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，刘成梅，梁汉萦，梁瑞红，涂宗财，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]
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