一种克隆多拷贝T-DNA旁侧植物DNA序列的方法技术

本发明专利技术公开了一种可有效克隆含多拷贝Ｔ－ＤＮＡ遗传修饰植物中Ｔ－ＤＮＡ旁侧植物ＤＮＡ序列的方法。本发明专利技术的主要步骤是用限制性内切酶切去除与植物ＤＮＡ相连的部分Ｔ－ＤＮＡ序列以外的其它Ｔ－ＤＮＡ序列，然后进行２轮ＴＡＩＬ－ＰＣＲ。酶切位点位于Ｔ－ＤＮＡ上的ＮＯＳ　　ｐｏｌｙ　　Ａ区或／和３５Ｓ　　ｐｏｌｙ　　Ａ区，ＴＡＩＬ－ＰＣＲ所用嵌套引物也是根据Ｔ－ＤＮＡ上的ＮＯＳ　　ｐｏｌｙ　　Ａ区和３５Ｓｐｏｌｙ　　Ａ区的序列设计，因此本方法具有通用性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种克隆转基因植物中多拷贝Ｔ－ＤＮＡ旁侧植物ＤＮＡ序列方法，包括以下步骤：　　　　（１）常规方法提取转基因植物基因组ＤＮＡ。　　　　（２）对步骤１中所述的ＤＮＡ进行酶切反应。　　　　（３）常规方法将步骤（２）中所述的酶切产物分离为两部分，回收大于５ｋｂ的片段部分。　　　　（４）以步骤（３）中所述的回收片段为模板，进行ＴＡＩＬ－ＰＣＲ扩增２轮。　　　　（５）按常规方法纯化、克隆步骤（４）中所述的ＴＡＩＬ－ＰＣＲ产物。使用ＰＣＲ法筛选阳性克隆后常规方法进行测序，得到Ｔ－ＤＮＡ旁侧的植物ＤＮＡ序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：景天忠，王志英，齐凤慧，
申请(专利权)人：东北林业大学，景天忠，王志英，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]