酶法水解蛋白制备磷酸肽和非磷酸肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶法水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽和酪蛋白非磷酸肽的方法，主要以酪蛋白为原料，采用单一碱性蛋白酶Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ进行控制水解，采用三硝基苯磺酸法监控ＤＨ值，用乙醇－钙分离法从酪蛋白水解液中同时制备ＣＰＰ和ＣＮＰＰ。ＣＰＰ的氮／磷摩尔比为２０～２５比１，得率３５％以上；ＣＮＰＰ得率达到４５％；鉴定出ＣＮＰＰ产品中两种ＡＣＥ抑制活性肽和一种抗氧化活性肽的氨基酸序列为Ｔｙｒ－Ｌｅｕ、Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ和Ｈｉｓ－Ｓｅｒ。本发明专利技术酶水解效果好，价格适宜，工艺路线合理，原料利用率高，易于放大，产品ＣＰＰ和ＣＮＰＰ可广泛应用于功能性食品配料和保健食品。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种酶法水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽和酪蛋白非磷酸肽的方法，以酪蛋白为原料，采用单一碱性蛋白酶Ａｌｃａｓａｓｅ２．４Ｌ进行控制水解，采用三硝基苯磺酸法监控ＤＨ值，然后采用乙醇－钙分离法从酪蛋白水解液中同时制备酪蛋白磷酸肽和酪蛋白非磷酸肽，工艺为：（１）溶解：在５５～６５℃下，将酪蛋白溶解在ＰＨ８．０～９．０的碱溶液中，配成质量浓度１６％～２０％的酪蛋白溶液；（２）酶解：按１～１．５ｍＬ酶液／１００ｇ酪蛋白的比例加入Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ，在５５～６５℃下搅拌２～４ｈ，取样，采用三硝基苯磺酸法监控ＤＨ值达到１５～２０，然后升温灭酶；（３）乙醇－钙沉淀：加入氯化钙质量／水解液体积比１．２％的氯化钙，再加入食用级乙醇终浓度７０％～８０％，搅拌３０ｍｉｎ，３０℃以下静置过夜；或３０００ｒｐｍ离心２０ｍｉｎ分层；（４）酪蛋白磷酸肽产品的获得：虹吸出上层清液，底部的沉淀部分３０００ｒｐｍ、１５ｍｉｎ离心，沉淀部分在４５℃以下真空干燥得到酪蛋白磷酸肽粉末产品，产品水分含量在４．５％以下；将上清液合并，为酪蛋白非磷酸肽部分；（５）酪蛋白非磷酸肽的纳滤浓缩与乙醇回收：对（４）的酪蛋白非磷酸肽部分以截留相对分子质量为３００Ｄ的纳滤膜进行纳滤，得到酪蛋白非磷酸肽纳滤浓缩液和回收乙醇；（６）大孔吸附树脂脱盐：浓缩所得６０～１５０ｍｇ／ｍｌ浓度的酪蛋白非磷酸肽以每小时１个床体积的流速上样至ＤＡ２０１－Ｃ大孔吸附树脂柱，水洗后用７０％乙醇解吸；（７）喷雾干燥：进出风温度分别为１６０～１８０℃和７０～８０℃，喷雾干燥得到酪蛋白非磷酸肽粉末；（８）酪蛋白非磷酸肽中ＡＣＥ抑制活性肽和抗氧化活性肽的结构鉴定：依次利用体积排阴色谱ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５、离子交换色谱ＤＴＦ－０２、大孔吸附树脂色谱ＤＡ２０１－Ｃ和半制备型ＲＰ－ＨＰＬＣ从酪蛋白非磷酸肽中分离得到两种抑制ＡＣＥ活性肽和一种抗氧化活性肽；再采用ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＬＣ／ＭＳ以及氨基酸分析证明这三种肽的氨基酸序列分别为Ｔｙｒ－Ｌｅｕ、Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ和Ｈｉｓ－Ｓｅｒ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡健，季万兰，
申请(专利权)人：江苏梁丰食品集团有限公司，
类型：发明
国别省市：32[]