一种抗氧化活性肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗氧化活性肽及其制备方法，主要是将血红蛋白干粉溶于水中，然后用中性蛋白酶进行水解，再进行脱盐、浓缩、冷冻干燥等即可。本发明专利技术抗氧化活性肽抗氧化能力强；本发明专利技术纯度高，纯度可达９５％以上，灰分小于１．５％；本发明专利技术安全性极高，无副作用，无不良风味；本发明专利技术抗氧化活性肽具有抗氧化作用外，同时还具有免疫调节、降血压、降胆固醇等作用；本发明专利技术生产成本低，可降低生产成本２５％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于保健药品或功能性食品生物工程领域，具体地说涉及一种抗氧 化活性肽，以及该抗氧化活性肽的制备方法
技术介绍
氧化是细胞生存所需的一种生理机制，细胞的这种依赖性会导致游离自由 基及活性氧的产生。当游离自由基的产生超过一定的数量时，它们的活性将大 于细胞保护酶的活性，这将直接导致细胞破坏性的致死作用(细胞凋亡)，细胞 的呼吸作用也随之停止。在人体的衰老和某些疾病的发生过程中，氧化起着重 要作用。机体内的氧化作用所产生的游离自由基可导致动脉粥样硬化、糖尿病及风湿性关节炎(Abuja， P等.Clinica Chimica Acta， 2001， 306: 1 17. Halliwell， B. Cardiovascular Research, 2000， 47:410 418. Halliwell， B 等.British Journal of Pharmacology, 2004， 142:231 - 255. Hoelzl， C等. Journal of Physiology肌d Pharmacology, 2005， 56:49 64)。氧化还危害至ll 阿茨海默病人的大脑中的所有主要的生物大分子(Halliwell, B. Drugs Aging， 2001， 18， 479 484.Liu， Q等.Molecular Aspects of Medicine, 2003， 24: 305 313)。现有的药物疗法都存在一定的副作用。食品的脂质过氧化作用会导致食品质量劣化，如会产生酸败味、不易接受 的口感，而且也会縮短食品的货架期。摄取一定量的过氧化食品会导致肝脏肥 大或上皮组织坏死等严重病情。 一些人工合成的抗氧化剂(BHA, BHT和n-propyl gallate)对某些氧化反应虽然具有一定的抑制作用，但是这些抗氧化剂在机体内 具有潜在的危害，其使用受到一定的限制。天然抗氧化剂由于具有安全、高效 的性质，已引起人们的极大关注。血红蛋白生物活性肽具有很多极为重要的功能活性，如阿片样活性(Brantl V等.Eur J Pharmacol 1986:125:309 - 10. Piot JM等.Biochem Biophys Res Commun 1992， 189: 101 - 110. Zhao QY等.Biochem Biophys Acta 1996， 1295: 73 - 80.Zhao， Q等.Biopolymers， 1997， 43:75 - 98.Nyberg F等，Inc.Biopoly， 1997， 43:147 - 56.Lignot B，等.Biotechnol Appl Biochem 1999， 30:201 - 7) 、 ACE抑制活性(Hyun， C. -K.等.Process Biochemistry, 2000,36:65 - 71)、增强血管舒缓激肽活性(Piot JM等，FEBS Lett 1992,299:75 - 79)、刺激细菌生长活性(Zhao， Q等.Analytica Chimica Acta, 1997,352:201 - 220)、镇痛活性(Takagi H等，Nature 1979， 5737:410 - 412. ZhaoQY等，J Liq Chrom Rel Technol 1997,20:1717 - 1739)、抗菌活性(Daoud R等，Peptides 2005， 26:713-719.Froide雨x R等，FEBS Lett 2001， 491:159 - 163.Li印ke C等，J Chromatogr B 2003， 791:345 - 356. Parish CA等，Bioorg Med Chem 2001,9:377 - 382)等。动物血液富含大量优质蛋白质，特别是血红蛋白占血液总蛋白质含量的 60 70%。但是目前动物血液却大部分被以污水的形式排放或丢弃，导致大量宝 贵营养资源流失，并且给环境造成了严重污染。利用血红蛋白制备抗氧化活性 肽不但有助于环境的保护，而且可以充分利用血液中大量宝贵的蛋白质开发为 功能食品、医药及化妆品等具有高附加值的生物制品。目前，尚未发现有关制备血红蛋白抗氧化活性肽的报道。
技术实现思路
本专利技术目的之一在于提供一种利用血红蛋白制备的抗氧化活性肽。 本专利技术另一 目的是提供上述抗氧化活性肽的制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为 本专利技术一种抗氧化活性肽，通过如下方法制备(1) 按照2 8%的重量百分比取血红蛋白干粉，并溶于蒸馏水中，在85 90。C下保温5 10min，得血红蛋白溶液；(2) 调节血红蛋白溶液的pH至6.7 7.2;按照0.05 0.10%的重量百分比 向血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在温度为45 55。C， pH为6.7 7.2条 件下水解3 4，5h，再在85 90。C下恒温5 10min;得血红蛋白水解产物溶液；(3) 通过离子交换树脂对步骤(2)所得血红蛋白水解产物进行脱盐，浓 縮、冷冻干燥，即得抗氧化活性肽。上述抗氧化活性肽中所述的中性蛋白酶是指AS1398中性蛋白酶，可于北京 东华强盛生物技术有限公司购买。上述抗氧化活性肽的制备方法，包括如下步骤 (1)按照2 8%的重量百分比取血红蛋白干粉，并溶于蒸馏水中，在85 9(TC下保温5 10min，得血红蛋白溶液；(2) 调节血红蛋白溶液的pH至6.7 7.2，按照0.05~0.10%的重量百分比 向血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在温度为45 55。C， pH为6.7 7.2条 件下水解3 4.5h，再在85 90。C下恒温5 10min;得血红蛋白水解产物溶液；(3) 通过离子交换树脂对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，浓縮、冷冻 干燥，即得抗氧化活性肽。上述制备方法中所述的中性蛋白酶是指AS1398中性蛋白酶，可于北京东华 强盛生物技术有限公司购买。本专利技术具有的优点和有益效果(1)本专利技术抗氧化活性肽抗氧化能力强， 抗氧化活性肽的活性(40mg/ml)高于同等浓度下常用天然抗氧化剂维生素C的 抗氧化力；(2)本专利技术纯度高，纯度可达95%以上，灰分小于1.5%; (3)本发 明是经食品级蛋白酶在温和条件下获得的，其安全性极高，无副作用，无不良风 味；(4)本专利技术抗氧化活性肽具有抗氧化作用外，同时还具有免疫调节、降血 压、降胆固醇等作用；(5)本专利技术生产成本低，可降低生产成本25%以上。 附图说明图1血红蛋白和血红蛋白抗氧化活性肽的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱； A血红蛋白；B血红蛋白抗氧化活性肽图2血红蛋白(20mg/ml)、蒸馏水与制备的抗氧化活性肽(20mg/ml)之 间抗氧化活力(还原力)柱形图。图3 BHT、 VC与抗氧化活性肽之抗氧化活力比较曲线图。具体实施方式实施例1取5g血红蛋白干粉(猪血经过离心喷雾干燥制得)，溶于100ml蒸馏水中， 在90。C下保温10min，然后用1NNaOH和1N HCL调节体系pH至7.0，接着加 入0.08g AS1398中性蛋白酶(购于北京东华强盛生物技术有限公司)，然后在 45°C、 pH值为7.0下水解4h，再在9(T本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗氧化活性肽，其特征在于按照如下方法制备：　　　　（１）按照２～８％的重量百分比取血红蛋白干粉，并溶于蒸馏水中，在８５～９０℃下保温５～１０ｍｉｎ，得血红蛋白溶液；　　　　（２）调节血红蛋白溶液的ｐＨ至６．７～７．２，按照０．０５～０．１０％的重量百分比向血红蛋白溶液中加入中性蛋白酶，然后在温度为４５～５５℃，ｐＨ为６．７～７．２条件下水解３～４．５ｈ，再在８５～９０℃下恒温５～１０ｍｉｎ；得血红蛋白水解产物溶液；　　　　（３）通过离子交换树脂对步骤（２）所得血红蛋白水解产物进行脱盐，浓缩、冷冻干燥，即得抗氧化活性肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗永康，孙骞，沈慧星，胡鑫，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]