生产百里酚的方法技术

本发明专利技术涉及生产百里酚的方法，包括如下步骤：培养诱导材料，即获取用作诱导材料的百里香无菌幼苗；制备愈伤组织，即将诱导材料接种到诱导培养基上获取愈伤组织；细胞悬浮培养，即将愈伤组织接到悬浮培养基中培养，获取细胞悬浮培养物和培养液；提取，即对细胞悬浮培养物和培养液进行提取以获取百里酚。采用本发明专利技术技术方案的生产百里酚的方法，由于可在实验室环境中实施，产业化之后不会受到恶劣环境影响；而且由于生长周期短，可以根据市场及时调整产量，避免不必要的浪费与损失。此外，由于产品的成份较天然植株中的精油简单，因而也减少了进一步纯化难度的变化；与有机合成法相比本发明专利技术不会释放污染物，因而是极具应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种。
技术介绍
人们利用百里香精油的历史悠久，比如埃及人用它来防腐尸体，罗马人 用它来抗菌，希腊人用它来帮助消化，地中海人用它来治疗呼吸困难及顽强的 皮肤病等等。百里香还可用于调味。在地中海沿岸国家，尤其是希腊和埃及等 国人民喜欢使用百里香作为香辛调料。我国西部人民早已有用百里香除去牛羊 肉膻气的传统。现在科学研究表明，百里香精油对霉菌有良好的抑制作用，可 以作为湿度较大地区人们家居之用。研究表明低浓度的百里香精油或百里酚就能够对发霉的墙壁进行消毒，并能够持久的抑制潮湿居所内的真菌生长(Klaric， Kosalec et al. 2007)。百里香精油可以刺激白细胞增殖，提升人体免疫系统 (Elhabazi， Dicko et al. 2006)，在治疗人免疫缺陷如癌症、白血病和AIDS 方面有巨大的应用潜力。百里香中的挥发性气体可强化肺脏，对支气管炎很有 帮助，对呼吸系统感染者也特别有益，百里香精油还可舒缓压力，消除神经性 疼痛；百里香精油的主要成份——百里酚具有抗血小板凝集的功能，可以开发 为抗血栓和血管硬化的药物(Okazaki， Kawazoe et al. 2002)。另外百里香还 能强化神经，活化脑细胞，能提高记忆力和注意力。也能提振低落的情绪、筋 疲力竭的感觉、以及挫败的沮丧感。目前，生产百里酚的主要方法是有机合成法，这种方法虽然操作简单，但 是极易造成环境污染。从植物中提取百里酚也是一种途径，但是此法目前成本 较高，而且由于精油成分较复杂，很难得到较纯净的百里酚；而且随着耕地的 不断减少，大规模的种植百里香必然会增加土地的压力。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够快速产业化。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案 ，包括如下步骤51) 、培养诱导材料即获取用作诱导材料的百里香无菌幼苗；52) 、制备愈伤组织将步骤Sl中所述诱导材料接种到诱导培养基上获 取愈伤组织；53) 、细胞悬浮培养将步骤S2中所述愈伤组织接到悬浮培养基中，在 培养条件下培养，以获取细胞悬浮培养物和培养液；54) 、提取对步骤S3中所述的细胞悬浮培养物和培养液进行提取，以 获取百里酚。优选的技术方案中，所述步骤S2之后还包括继代培养及改善的步骤；所述继代培养及改善是指将步骤S2中形成的浅褐色的松软愈伤组织，接到继代培养 及改善培养基上，以减轻愈伤组织的褐化。进一步优选的技术方案中，所述继代培养及改善培养基是指MS+2， 4-二氯苯 氧乙酸0. 1 0. 5mg/L +苄基腺嘌呤0. 1 mg/L+0， 02%活性炭+蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8§/乙优选的技术方案中，步骤S2中所述诱导培养基是指MS+ 2， 4-二氯苯氧乙酸 0. 1 2. Omg/L +蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L或者MS+ 2， 4-二氯苯氧乙 酸0. 1 2. Omg/L +苄基腺嘌呤0. lmg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L。进一步优选的技术方案中，所述诱导培养基优选为MS+2，4-二氯苯氧乙酸 0.5mg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L或者MS + 2， 4-二氯苯氧乙酸 0. 5mg/L+苄基腺嘌呤0. lmg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L。优选的技术方案中，步骤S2中所述接种到诱导培养基上的诱导材料为步骤 S2中所述百里香无菌幼苗的下胚轴。进一步优选的技术方案中，所述下胚轴优选长势好的百里香无菌幼苗的下 胚轴。优选的技术方案中，步骤S3中所述悬浮培养基是指MS+2， 4-二氯苯氧乙酸 0. 1 0. 5mg/L +苄基腺嘌呤0. 1 0. 5mg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L ;所述培养条件 是指12h/12h光照以及25"C的温度条件下，以50 100r/min的速度搅拌。优选的技术方案中，步骤S4所述的提取是指有机溶剂萃取。进一步优选的技术方案中，所述有机溶剂萃取具体为先采用石油醚在常 温下萃取，然后采用旋转蒸发仪浓縮萃取液，最后在常温下进一步挥发萃取液。 采用本专利技术技术方案的，与现有技术对比的有益效果在于由于可在实验室环境中实施，因此产业化之后不会受到恶劣环境的影响； 而且由于生长周期短，可以根据市场及时调整产量，避免不必要的浪费与损失。 此外，由于产品的成份较天然植株中的精油简单，因而也减少了进一步纯化难 度的变化；与有机合成法相比本专利技术还不会释放污染物，因而是一种极具应用 价值的。由于进一步包括继代培养及改善的步骤，可以减轻愈伤组织的褐化。 由于继代培养及改善培养基为MS+2，4-二氯苯氧乙酸0. 1 0.5mg/L +苄基 腺嘌呤0. 1 mg/L+活性炭0. 02% +蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L，改善效 果明显。由于诱导培养基为MS+ 2， 4-二氯苯氧乙酸0. 1 2. Omg/L +蔗糖20g/L +琼 脂6g/L或者MS+ 2, 4-二氯苯氧乙酸0. 1 2. Omg/L +苄基腺嘌呤0. lmg/L+蔗糖 2 0 4 0 g/L +琼脂6g/L，诱导效果较好。由于诱导培养基优选为MS+2，4-二氯苯氧乙酸0.5mg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L +琼脂6 8 g/L或者MS+2， 4-二氯苯氧乙酸0. 5mg/L+苄基腺嘌呤0. lmg/L +蔗糖2 0 4 Og/L +琼脂6 8§/1，诱导效果最好。由于诱导材料优选百里香幼苗的下胚轴，实验证明下胚轴的诱导效果最好。由于下胚轴优选长势好且无菌的百里香幼苗的下胚轴，可以保证诱导过程 的顺利进行，以及诱导出的愈伤组织具备较好的遗传学质量。由于悬浮培养基为MS+2,4-二氯苯氧乙酸0. 1 0. 5mg/L +苄基腺嘌呤0. 1 0. 5mg/L+蔗糖2 0 4 0 g/L ;且培养条件为12h/12h光照以及25。C的温度 条件下，以50 100r/min的速度搅拌，可以保证良好的培养效果。由于采用有机萃取提取百里酚，工艺成熟、效果好。由于有机萃取具体包括石油醚常温萃取，旋转蒸发仪浓縮，和常温下挥发， 可以获得更为浓縮的有用物质。附图说明图1是本专利技术具体实施方式中对提取物GC-MS分析的图谱。 以下将结合附图对做进一步说明。 具体实施例方式本专利技术选用的百里香(r力yM/S ^/2卵ris)是法国百里香，其精油主要成份是 百里酚和香芹酚，有抗菌、消炎和防腐的功能，其中起主要作用的是百里酚和 香芹酚，可广泛运用在医疗、美容、烹饪及食品等领域。随着对百里香研究的 不断深入，百里香精油和百里酚的运用前景十分巨大。基于细胞全能性的观点，悬浮培养的细胞虽然分化程度较低，但是具备植物基因组的全部信息，因而具备分化为植株的潜能，所以从理论上说百里香(7. ^A^aris)细胞作为生物反应器生产百里酚是可行的。本专利技术的目的就在于建立 百里香细胞悬浮培养体系，并利用这个细胞悬浮培养体系产生具有较高应用价 值的百里酚。建立细胞悬浮培养体系需要得到分散程度较高的细胞，这种细胞的获得一 般有两种途径，其一是通过酶解植物组织得到分散细胞，其二是通过松软愈伤 组织得到分散细胞。本法通过愈伤组织培本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产百里酚的方法，包括如下步骤：　　　　Ｓ１）、培养诱导材料：即获取用作诱导材料的百里香无菌幼苗；　　　　Ｓ２）、制备愈伤组织：将步骤Ｓ１中所述诱导材料接种到诱导培养基上获取愈伤组织；　　　　Ｓ３）、细胞悬浮培养：将步骤Ｓ２中所述愈伤组织接到悬浮培养基中，在培养条件下培养，以获取细胞悬浮培养物和培养液；　　　　Ｓ４）、提取：对步骤Ｓ３中所述的细胞悬浮培养物和培养液进行提取，以获取百里酚。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓东，邓盾，卢爱华，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]