人胆固醇酯合成酶－2c及其编码序列制造技术

一种人胆固醇酯合成酶－２ｃ，其特征在于，该蛋白选自下组：（ａ）具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的蛋白、或其保守性变异蛋白、或其活性片段、或其活性衍生物。（ｂ）将ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列经过一个或多个氨基酸 残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有人胆固醇酯合成酶－２ｃ的功能的由（ａ）衍生的蛋白。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化学、分子生物学、基因工程和DNA重组
更具体地，涉及人胆固醇酯合成酶-2c(ACAT2c)及其编码序列和它们的应用。
技术介绍
人胆固醇酯合成酶即人酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT，Acyl-coenzyme Acholesterol acyltransferase，EC2.3.1.26)，是人细胞内唯一催化长链脂肪酸和游离胆固醇形成胆固醇酯的酶。ACAT在生物体内发挥重要的生理功能，主要参与生物体胆固醇及其酯类吸收、运输和储存等过程，是维持体内胆固醇及其酯类代谢平衡的关键酶之一。国内外大量研究表明，它在巨噬细胞中高活性地合成胆固醇酯，导致细胞内胆固醇酯的过量堆积而形成泡沫细胞，引起动脉粥样硬化(AS)早期病变；它的活性可影响神经细胞膜内的胆固醇量，而直接调节产生Aβ蛋白，与老年痴呆病变(AD)相关；它在肝、肠细胞中的活性变化，可直接影响合成胆固醇酯、胆固醇的吸收、脂蛋白的装配，直至影响胆固醇的血液水平和血液转运，与高胆固醇酯症直接相关；而长期饮食来源胆固醇的吸收缺乏，同样引起严重疾病，如小孩、老年的痴呆症等。因此，它是极重要的胆固醇代谢相关疾病药物靶蛋白，国际上已把ACAT作为发展抗动脉粥样硬化病变药物的主攻靶蛋白。但是，ACAT又是含量极低的一种内质网膜膜蛋白，即使国际上许多实验室或公司长期投入大量人、物力等进行研究，至今未能纯化其天然型酶蛋白。所以，开展基因水平的工作，对深入研究ACAT的作用机制与结构功能及其与相关疾病的关系，显得极为重要，是目前唯一切实可行的途径。目前在哺乳动物中发现有编码ACAT1和ACAT2的两种不同ACAT基因。1993年，美国Dartmouth医学院Chang TY实验室，首次克隆了具有活性功能的人ACAT1 cDNA(4011bp)，其开放阅读框编码550个氨基酸序列(Chang TY et al.，1993，J.Biol.Chem.，26820747-20755)。1996年，美国加州大学旧金山分校的R.V.Farese实验室成功进行了小鼠ACAT1基因敲除实验，并分析发现在肝脏和小肠中，仍有较强ACAT酶活性，由此推测存在另一种形式的ACAT。从计算机分析ACAT保守序列出发，1998年，三家实验室分别克隆了非洲绿猴(Anderson RA et al.，1998，J.Biol.Chem.，27326747-26754)、小鼠(Cases Set al.，1998，J.Biol.Chem.，27326755-26764)和人(Oelkers P et al.，1998，J.Biol.Chem.，27326765-26771)的ACAT2 cDNA。人ACAT2 cDNA长约2040bp，其开放阅读框编码522个氨基酸。ACAT1几乎在所有组织中都表达，而ACAT2只在肝脏和小肠中有高表达。因此，ACAT2被认为主要参与饮食来源胆固醇的吸收和含ApoB载脂蛋白的装配与分泌，直接与胆固醇的血液水平和血液转运密切关联。1999年，专利技术人实验室和Chang TY实验室合作发表了人ACAT1基因组DNA结构组织，并且发现人ACAT1 mRNA序列分别来自于两条不同的染色体(Li Bo-Liang et al.，J.Biol.Chem.，1999，27411060-11071)。同时，专利技术人又开展了人ACAT2基因组DNA结构组织等研究。在肝、肠细胞中，专利技术人发现除了与国外同行发表的长约2040bp的ACAT2 cDNA(系统命名为ACAT2a cDNA)相同外，还存在另一种ACAT2c cDNA形式。ACAT2的多种形式存在，表明该基因功能的重要性和复杂性。随着中国人民生活水平的提高和饮食结构的改变，心血管疾病和神经蜕变性疾病越来越成为威胁人们生命健康的重要杀手，大量流行病学和分子水平的研究已证明这些疾病与生物体内胆固醇水平密切相关。由于ACAT在体内胆固醇平衡和动脉粥样硬化发病过程中起了关键作用，因此筛选ACAT的特异抑制剂成为一些制药公司竞相研究的热点。由于天然形式的ACAT蛋白还没有纯化成功，因此寻找ACAT特异有效的抑制剂还很困难。国内外越来越多的科学家和医药大公司参与到了该领域的研究。尤其是研究心血管疾病的科研专家们，特别希望能够筛选专利技术针对抗动脉粥样硬化ACAT的心血管病药物。最新文献认为，肝、肠细胞特异表达的ACAT2参与外源胆固醇的吸收和脂蛋白的装配，直接影响血液中胆固醇水平，而以ACAT2为作用靶蛋白的药物，会在控制人体胆固醇水平的同时又不破坏细胞内的胆固醇平衡，所以对ACAT2的研究越来越受到人们的重视。专利技术人发现的ACAT2c，对于阐明ACAT的重要功能和揭示高胆固醇酯症、动脉粥样硬化等的分子机理具有重要意义，此项基础性研究突破，将会很快引发它的应用性研究，并迅速促进胆固醇相关疾病如心血管病等药物的专利技术。然而，在本申请之前，还没有获得人胆固醇酯合成酶2c及其编码序列。因此，本领域迫切需要开发人胆固醇酯合成酶2c及其编码序列。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种新的人胆固醇酯合成酶2c及其编码序列。本专利技术的另一目的是提供生产这些人胆固醇酯合成酶及其编码序列的方法以及它们的用途。本专利技术的第一方面，提供了一种人胆固醇酯合成酶-2c，所述蛋白选自下组(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白、或其保守性变异蛋白、或其活性片段、或其活性衍生物。(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有人胆固醇酯合成酶-2c的功能的由(a)衍生的蛋白。在一优选例中，所述人胆固醇酯合成酶-2c(ACAT2c)具有SEQ ID NO2所示的氨基酸序列。本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含一选自下组的核苷酸序列(a)编码上述蛋白的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。优选的，所述多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的蛋白。较佳的，所述多核苷酸的序列包含选自下组的一种(a)SEQ ID NO1中13-1152位的序列；(b)SEQ ID NO1中1-1156位的序列。更佳的，所述多核苷酸的序列具有选自下组的一种(a)SEQ ID NO1中13-1152位的序列；(b)SEQ ID NO1中1-1156位的序列。本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有上述多核苷酸。较佳的，所述多核苷酸包含SEQ ID NO1中13-1152位序列。本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含上述载体。优选的，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。更佳的，所述的宿主细胞是小鼠、大鼠或人的细胞。本专利技术的第五方面，提供了一种具有人胆固醇酯合成酶-2c活性的蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包含(a)在适合表达人胆固醇酯合成酶-2c的条件下，培养上述宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人胆固醇酯合成酶-2c活性的蛋白。本专利技术的第六方面，提供了一种能与上述人胆固醇酯合成酶-2c特异性结合的抗体。本专利技术的第七方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有安全有效量的上述人胆固醇酯合成酶-2c、或上述多核苷酸，以及药学上可接受的载体。本专利技术的第八方面，提供了所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李伯良，宋保亮，杨新颖，姚晓敏，戚炜，张大元，王灿华，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：