一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法技术

本发明专利技术具体涉及一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，属于分析化学技术领域。其技术要点主要包括以下几个步骤：深共融溶剂的制备、待测溶液的制备、对照品混合液的制备、标准曲线的建立、待测样品中玛咖酰胺含量的测定。本发明专利技术的提取方法使用的深共融溶剂有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用，原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％，解决了传统提取方法有机溶剂毒性大、提取率低、成本高、提取时间较长、提取次数多的问题。

A method for the extraction and determination of 5 kinds of Maca amide in Maca by deep melting solvent

The invention specifically relates to a method for the extraction and determination of 5 kinds of Maca amide in Maca by using deep eutectic solvent, which belongs to the field of analytical chemistry. The main points of the technology include the following steps: preparation of deep eutectic solvents, preparation of prepared solutions, preparation of standard mixture, establishment of standard curve and determination of Maca amide in the samples to be tested. The use of the method for extracting the deep eutectic solvent has better chemical stability, can be designed and can be recycled, cheap material and green environmental protection, the synthesis process is simple and does not require the introduction of other organic solvents can obtain products with high purity, atom economy reached 100%, to solve the traditional organic solvent extraction method toxic, low, high cost, long extraction time, extraction times and the extraction rate of the problem.

【技术实现步骤摘要】
一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法
本专利技术属于分析化学
，具体涉及一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法。
技术介绍
玛咖(Lepidiummeyenii)为十字花科独行菜属的一种一年生草本植物，最早生长在海拔超过4000米的秘鲁中央的安第斯山区，具有2000年的食用历史。玛咖的根茎部分比地上部分具有更高的营养价值，根形似小圆萝卜，外形颜色有紫、黑、黄等。研究表明玛咖具有丰富的营养价值和药用价值，玛咖还具有许多传统的疗效，如作为泻药、治疗风湿病、呼吸道疾病、痛经及女性更年期综合征等。另外，玛咖还具有改善性功能、提高人畜生育能力、缓解疲劳及抗氧化等功能。基于以上特点，玛咖被称为“秘鲁人参”。玛咖中的玛咖酰胺被视为主要的活性功能成分，是评价玛咖质量的重要标准。目前对提取玛咖酰胺的溶剂很多，但都是有机化合物，对人体危害大、对环境污染较严重。而深共融溶剂有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用等优点，与有机溶剂相比还具有原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％。目前用深共融溶剂(DESs)提取中药中有效成分的方法已有报道，但是用DESs提取玛咖中玛咖酰胺的报道还没有出现。
技术实现思路
为弥补现有技术的不足，本专利技术提供的采用DESs做提取剂提取玛咖中5种玛咖酰胺并用HPLC测定其含量的方法，提取含量比石油醚高，并且简便快捷，有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用等优点，是一种分析玛咖酰胺类成分的有效途径，有望替代有机溶剂来提取玛咖中玛咖酰胺。本专利技术的技术方案如下：一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，包括以下步骤：(1)深共融溶剂的制备氯化胆碱经真空干燥12h后，按照摩尔比为1:2分别称取氯化胆碱和1,6-己二醇置于圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；(2)待测溶液的制备将玛咖粉末按照1g:10mL料液比加入含30wt％水的深共融溶剂中，70℃下超声波提取30min，离心后上清液即为提取液；将提取液溶解于甲醇中得到待测溶液，其中提取液的体积浓度为10％；(3)对照品混合液的制备分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十六烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；(4)标准曲线的建立分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；色谱条件如下：色谱柱为XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器为G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；以步骤(3)中各对照品混合液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；(5)待测溶液中玛咖酰胺含量的测定按步骤(4)的色谱条件对待测溶液进行测定，并利用标准曲线计算待测样品中每种玛咖酰胺的含量。进一步的，步骤(4)中所述的多组对照品混合溶液中各对照品的浓度范围分别为：N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺0.5～85μg/mL、N-苄基亚麻酰胺3～700μg/mL、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺0.5～100μg/mL、N-苄基亚油酰胺4～2000μg/mL、N-苄基十六烷酰胺1～2000μg/mL。进一步的，对N-(间甲氧基苄基)-亚麻酰胺的检出限为2.57μg/mL。进一步的，对N-苄基亚麻酰胺的检出限为1.46μg/mL。进一步的，对N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺的检出限为2.06μg/mL。进一步的，对N-苄基亚油酰胺的检出限为1.64μg/mL。进一步的，对N-苄基十六烷酰胺的检出限为2.82μg/mL。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术的提取方法使用的DESs有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用，原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％，解决了传统提取方法有机溶剂毒性大、提取率低、成本高、提取时间较长、提取次数多的问题；(2)本专利技术的检测方法为高效液相色谱(HPLC)检测，采用梯度洗脱方法，分离度好，可以同时检测玛咖中5种玛咖酰胺；本专利技术只用乙腈和水作为流动相，解决了三氟乙酸对色谱柱损耗大、清洗不便等问题，流动相配置方便，简便了操作；(3)本专利技术的提取测定方法线性关系良好、精密度高、重复性好、稳定性好、回收率高、简便、快捷并且准确可行，可作为玛咖中玛咖酰胺标准的定量检测方法。附图说明图1为DESs提取玛咖样品液相色谱图；图2为石油醚提取玛咖样品液相色谱图。其中：1为编号C1，2为编号C2，3为编号C3，4为编号C4，5为编号C5。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但本专利技术不以任何形式受限于实施例内容。实施例中所述试验方法如无特殊说明，均为常规方法；如无特殊说明，所述试剂和生物材料，均可从商业途径获得。实施例1本实施例选择西藏地区黄玛咖作为待测样品进行测定，具体步骤如下：(1)DESs的制备氯化胆碱经真空干燥12h后，然后按摩尔比为1:2分别称取一定量的氯化胆碱和1,6-己二醇置于100ml的圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；(2)待测溶液的制备粉碎，过筛，精密称取玛咖粉末，以1g:10mL料液比加入已制备好的含有30％水的DESs中，70℃下超声提取30min，离心，取提取液1mL用甲醇定容至10mL的容量瓶中，待HPLC定量分析；(3)对照品混合液的制备分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十七烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；各对照品的浓度具体如下表1：表1各对照品的浓度*表1中浓度单位为μg/mL。(4)标准曲线的建立分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；色谱条件为：色谱柱XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；以步骤(3)中各对照品的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；按信噪比3:1确定检测限，标准曲线方程及检出限见表2；表25种玛咖酰胺对照品标准曲线方程(5)待测溶液中5种玛咖酰胺含量的测定色谱条件为：色谱柱XtimateXB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相为A(水)和B(乙腈)，梯度：0～24min，80vt％B～100vt％B；检测器G4212-600本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)深共融溶剂的制备氯化胆碱经真空干燥12h后，按照摩尔比为1:2分别称取氯化胆碱和1,6‑己二醇置于圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；(2)待测溶液的制备将玛咖粉末按照1g:10mL料液比加入含30wt％水的深共融溶剂中，70℃下超声波提取30min，离心后上清液即为提取液；将提取液溶解于甲醇中得到待测溶液，其中提取液的体积浓度为10％；(3)对照品混合液的制备分别精密称取N‑(间‑甲氧基苄基)‑亚麻酰胺、N‑苄基亚麻酰胺、N‑(间甲氧基苄基)‑亚油酰胺、N‑苄基亚油酰胺、N‑苄基十六烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；(4)标准曲线的建立分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；色谱条件如下：色谱柱为XtimateXB‑C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器为G4212‑60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；以步骤(3)中各对照品混合液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；(5)待测溶液中玛咖酰胺含量的测定按步骤(4)的色谱条件对待测溶液进行测定，并利用标准曲线计算待测样品中每种玛咖酰胺的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)深共融溶剂的制备氯化胆碱经真空干燥12h后，按照摩尔比为1:2分别称取氯化胆碱和1,6-己二醇置于圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；(2)待测溶液的制备将玛咖粉末按照1g:10mL料液比加入含30wt％水的深共融溶剂中，70℃下超声波提取30min，离心后上清液即为提取液；将提取液溶解于甲醇中得到待测溶液，其中提取液的体积浓度为10％；(3)对照品混合液的制备分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十六烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；(4)标准曲线的建立分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；色谱条件如下：色谱柱为XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器为G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；以步骤(3)中各对照品混合液的质量浓度为横坐标，峰面...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珂珂，弓晓杰，陈书笑，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21