本发明专利技术公开了一种铁线莲Ｃｌｅｍａｔｉｓ Ｍｕｌｔｉ－Ｂｌｕｅ组织培养方法，其培养步骤为：丛生芽繁殖：（１）取铁线莲茎尖分别用酒精及升汞消毒，用天菌水冲洗后，进行（２）初代培养→（３）继续代培养→（４）生根培养；胚状体繁殖：第（１）、（２）、（３）步骤通丛生芽繁殖，（４）继代培养２→（５）生根培养。采用组织培养方法，能较好地保持母本的观赏价值，有效地提高铁线莲地繁殖系数，与播种繁殖相比，组织培养法能有效地保持母本的优良性状，不易产生性状变异，与常规扦插繁殖相比在一个生长季内，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖的３０－５０倍。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养方法，具体地说是涉及铁线莲Clemati Multi-Blue组织培养方法。
技术介绍
铁线莲隶属毛茛科Ranunculaceae铁线莲属(Clematis L.)(Wang Wen-Tsai.2000，Notes on the genus Clematis(Ranunculaceae)(I).Acta PhytotaxonomicaSinica.38(4)305-336；Wang Wen-Tsai.2000，Notes on the genusClematis(Ranunculaceae)(II).Acta Phytotaxonomica Sinica.38(5)401-429；Wang Wen-Tsai.2000，Notes on the genus Clematis(Ranunculaceae)(III).ActaPhytotaxonomica Sinica.38(6)497～514；Wang Wen-Tsai.2001，Notes on thegenusClematis(Ranunculaceae)(IV).ActaPhytotaxonomicaSinica.，39(1)1-19；Wang W-T.2004.A revision of Clematis sect.Aspidanthera s.1.(Ranunculaceae).Acta.Phytotaxonomica Sinica 421-72，97-135)。是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物，有很高的观赏价值(Brandenburg WA.2000.Meclatis in ClematisYellow Flowering Clematis Species.Systematic Studies in Clematis I.(Ranunculaceae)，Inclusive of CultonomicAspects.WageningenWageningen Universiteit.Durzan D J，Gupta P K.1987，Somatic embryogenesis and polyembryogenesis in Douglas-fir cellsuspension cultures.Plant Sci，52229～235；Essig F B.1991.Seedlingmorphology in Clematis(Ranunculaceae)and its taxonomic implications.Sida 14377-390；Grey-Wilson C.2000.Clematis the genus.Portland，OregonTimber Press)。铁线莲属植物的现有繁殖技术如下(1)播种繁殖播种繁殖多用于原始种类。种子(瘦果)成熟后及时采收，清除残存花柱，晾干。沙藏处理，翌春再播，或直接秋播。但Clematis Multi-Blue为铁线莲属植物的一个著名栽培重瓣品种(Mary Toomey.，Everett Leeds.2001，Anillustrated Encyclopedia of Clematis，Timber Press.UK.19-22)。由于雄蕊瓣化，雌蕊较单瓣品种退化，很难得到甚至得不到健壮的种子，且用种子繁殖不能很好地保持母本的重瓣性状，故不宜用此法(Tamura M，Mizumoto Y，KubotaH.1977.Observations on seedlings of the Ranunculaceae.The Journal ofJapanese Botany 52293-304)。(2)扦插繁殖扦插繁殖多用于栽培品种的繁殖。选择优良品种的健壮无病株(P.van deGraaf，etc.2002，Prepenetration stages in infection of Clematis by PhomaClematidina.Plant Patbology 51，331-337.P.van de Graaf，T.M.O’Nell，etc.2003，Aspects of the Biology and Control of Benzimidazole ResistantIsolates of Phoma Clematidina.cause of Leaf Spot and Wilt in Clematis.Phytopathology，151，442-450)。在春季3-5月间，植株生长旺盛进入开花期进行。但扦插的繁殖系数相对较小。且Clematis Multi-Blue为早花类型，故剪取插穗影响植株的正常开花。(3)压条、嫁接繁殖压条繁殖选作压条的母株应是优良无病、枝条旺盛的(管开云，李志坚，李景秀等。2002，铁线莲属植物的引种栽培研究初报.云南植物研究.28(2)392-396.李志坚，管开云，李景秀等。2002，铁线莲属植物的病虫害及防治.植物保护.28(2)35-36)。在雨季来临前进行压条处理。将选好的条子中段最壮的节段弯下，用清洁的利刀划破形成层部位，平卧压于土中，填土3-4cm，经常保存植株周围与被压枝条填土的潮湿。3个月生根后，可与母株分离，独立生长。嫁接对于铁线莲杂交种，可用单节接穗以劈接法接于C.vitalba或C.viticella根砧上(王瑞江，陈忠毅.2000，国产毛茛科植物资料.云南植物研究.22(2)126-128；张美珍，方明渊，凌苹苹等。1980，中国植物志.北京科学出版社，28286-300)。节上具1-2芽，节下长5-10cm，在加温而密闭的嫁接匣里嫁接，易促进成活。但这两种方法的缺点均为繁殖系数太小，不能达到大量引种繁殖的需要。
技术实现思路
1.专利技术目的本专利技术的目的是针对铁线莲(Clematis Multi-Blue)现有繁殖技术较落后的问题，提供一种采用组织培养方法来提高其繁殖系数以适应引种推广的需求。2.技术方案铁线莲(Clematis Multi-Blue)的组织培养方法、其丛生芽繁殖的步骤如下(1)取铁线莲ClematisMulti-Blue的茎尖于超净工作台上用70％-75％酒精消毒，无菌水冲洗，再用0.1％-0.15％升汞消毒，无菌水冲洗后备用；(2)初代培养将灭菌好的外植体茎尖接种入MS+BA0.3-0.8mg·L-1+NAA0.01-0.05mg·L-1，25-35天后进行继代培养； (3)继代培养将初代培养的外植体转接到1/2MS+TDZ0.3-1.0mg·L-1+NAA0.01-0.05mg·L-1培养基上进行继代培养，培养25-40天；(4)生根培养剪取2.5cm-3.5cm长的丛生芽接入到生根培养基中1/2MS+NAA0.1-0.5mg·L-1，暗培养7-10天后进行光下培养，光照强度为1500-3000lx，2周后生根；铁线莲Clematis Multi-Blue组织培养方法其胚状体繁殖的步骤如下(1)取铁线莲Clematis Multi-Blue的茎尖于超净工作台上用70％-75％酒精消毒，无菌水冲洗，再用0.1％-0.15％升汞消毒，无菌水冲洗后备用；(2)初代培养将灭菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铁线莲ＣｌｅｍａｔｉｓＭｕｌｔｉ－Ｂｌｕｅ组织培养方法，其丛生芽繁殖的步骤如下：（１）取铁线莲ＣｌｅｍａｔｉｓＭｕｌｔｉ－Ｂｌｕｅ的茎尖于超净工作台上用酒精消毒，无菌水冲洗，再用升汞消毒，无菌水冲洗后备用；（２） 初代培养：将灭菌好的外植体茎尖接入ＭＳ＋ＢＡ０．３－０．８ｍｇ.Ｌ－１＋ＮＡＡ０．０１－０．０５ｍｇ.Ｌ－１，２５－３５天后进行继代培养；（３）继代培养：将初代培养的外植体转接到１／２ＭＳ＋ＴＤＺ０．３－１．０ｍｇ.Ｌ－１＋ＮＡＡ０ ．０１－０．０５ｍｇ.Ｌ↑［－１］培养基上进行继代培养，培养２５－４０天；（４）生根培养：剪取２．５ｃｍ－３．５ｃｍ长的丛生芽接种到生根培养基中：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．１－０．５ｍｇ.Ｌ↑［－１］，暗培养７－１０天后进行光下培养；。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：方炎明，张启香，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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