能诱导干细胞向成骨细胞分化的微小RNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能诱导干细胞向成骨细胞分化的微小ＲＮＡ及其应用。本发明专利技术公开的微小ＲＮＡ，是下述核糖核酸之一：是下述ａ１）的双链ＲＮＡ或ｂ１）的单链ＲＮＡ：ａ１）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列１－９，另一条链与序列表中序列１－９反向互补；ｂ１）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列１－９的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列１－９反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ。本发明专利技术的微小ＲＮＡ可制备治疗骨科疾病的药物，该药物可治疗骨质疏松、骨折、骨裂，股骨头坏死等骨科疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及能诱导干细胞向成骨细胞分化的微小RNA及其应用。
技术介绍
微小RNA (microRNA)是一类长度约为21-24个核苷酸的非编码RNA，在基因 的表达调节中起重要作用。微小RNA与Ago等酶和蛋白形成复合物结合到耙基因的 mRNA3'非翻译区，阻碍mRNA的翻译或造成mRNA的降解。有证据提示微小RNA参 与生命过程中一系列的重要进程，具有调节细胞增殖、分化、死亡、个体发育等生 物学功能。微小RNA可被看作为一类内源性的小干扰RNA。小RNA将成为继化学药 物和蛋白类药物之后的第三代药物。但是化学合成的微小RNA要进入临床应用存在 如下几个问题1)微小RNA在体液中的稳定性差；2)微小RNA要进入细胞需要 体内转染试剂的介导，而目前使用的体内转染试剂存在效率差、用量大、毒性较大 的问题；3)化学合成的微小RNA半衰期短、需多次用药、成本难以承受。用病毒 类载体表达微小RNA可以克服化学合成的微小RNA存在的问题，但病毒载体的安全 性堪忧。干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，能分化发育成不同的组织细 胞。干细胞的自我更新和多向分化过程的调控机制复杂，近期的研究发现微小RNA 正是这些复杂的调控机制中非常重要的组成部分，在发育中扮演着主要角色，是干 细胞命运的决定因子。尽管有大量证据显示千细胞治疗为某些传统方法难以治愈的 疾病提供了新的疗法，有良好的应用前景，但临床上仍然存在质疑之声。除安全 性的考虑之外，缺乏细胞替代的证据以及由此引起的疗效不持久是引起质疑的重要 原因。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类能诱导干细胞向成骨细胞分化的微小RNA及其应用。 本专利技术所提供的微小RNA，是下述核糖核酸之一 1)是下述al)的双链RNA或bl)的单链RNA:al)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列l，另一条链与序列表中序列1反 向互补；bl)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列1的单链RNA分子和核苷酸序列与序列表中序列1反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;2) 是下述a2)的双链RNA或b2)的单链RNA:a2)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列2，另一条链与序列表中序列2反 向互补；b2)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列2的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列2反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;3) 是下述a3)的双链RNA或b3)的单链RNA:a3)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列3，另一条链与序列表中序列3反 向互补；b3)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列3的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列3反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;4) 是下述a4)的双链RNA或b4)的单链RNA:a4)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列4，另一条链与序列表中序列4反 向互补；b4)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列4的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列4反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;5) 是下述a5)的双链RNA或b5)的单链RNA:a5)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列5，另一条链与序列表中序列5反 向互补；b5)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列5的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列5反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;6) 是下述a6)的双链RNA或b6)的单链RNA:a6)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列6，另一条链与序列表中序列6反 向互补；b6)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列6的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列6反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;7) 是下述a7)的双链RNA或b7)的单链RNA:a7)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列7，另一条链与序列表中序列7反 向互补；b7)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列7的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列7反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;8) 是下述a8)的双链RNA或b8)的单链RNA:a8)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列8，另一条链与序列表中序列8反 向互补；b8)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列8的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列8反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA;9) 是下述a9)的双链RNA或b9)的单链RNA:a9)其一条链的核苷酸序列为序列表中序列9，另一条链与序列表中序列9反 向互补；b9)通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列9的单链RNA分子和核苷酸序 列与序列表中序列9反向互补的单链RNA分子连接起来获得的重组单链RNA分子； 所述连接序列为TTCAAGAGA。其中，所述微小RNA也可经过2'-脱氧化学修饰。导入本专利技术所述的微小RNA的细胞也属于本专利技术的保护范围，所述细胞为人的 成体干细胞。导入微小RNA的人的成体干细胞可以用于骨科疾病治疗，或植于骨支 架材料中(scafold materials)进行复合培养，用于骨缺损或股骨头坏死的治疗。其中，所述人的成体干细胞具体可为骨髓基质干细胞、脐带血千细胞、外周血 干细胞或羊膜干细胞。所述骨科疾病具体可为骨质疏松、骨折、骨裂、骨缺损或股 骨头坏死等。本专利技术的另一个目的是提供一种治疗骨科疾病的药物。 本专利技术所提供的治疗骨科疾病的药物，其活性成分为所述的微小RNA。其中，所述骨科疾病具体可为骨质疏松、骨折、骨裂、骨缺损或股骨头坏死。所述的微小RNA可以与脂质体、纳米颗粒、PEI、蛋白或多肽类的转染试剂混合后制成所述的治疗骨科疾病的药物。所述治疗骨科疾病的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。本专利技术所提供的治疗骨科疾病的药物，还可以是其活性成分为含有所述微小RNA的人的成体干细胞。本专利技术的微小RNA可以在体外导入人的成体干细胞，所述的人的成体干细胞即 可作为治疗骨科疾病的药物。也可以将导入微小RNA的人的成体干细胞种植于骨支 架材料(scafold materials)中进行复合培养后，再用于骨缺损或股骨头坏死的 治疗。所述人的成体干细胞具体可为骨髓基质干细胞、脐带血干细胞、外周血干细 胞或羊膜干细胞。所述骨科疾病为骨质疏松、骨折、骨裂、骨缺损或股骨头坏死。所述治疗骨科疾病的药物可经静脉注射输入体内或经局部注射进入病变的组织。本专利技术的微小RNA可诱导骨髓基质干细胞(MSC)及其它成体组织干细胞向成 骨细胞分化。本专利技术的化学合成的在体外使用还避免了微小RNA在体液中的稳定性 差，体内转染试剂效率差、用量大、毒性较大的缺点；且半衰期长、无需多次用 药。附图说明图1 miR-20家族。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微小ＲＮＡ，是下述核糖核酸之一：　１）是下述　ａ１）的双链ＲＮＡ或ｂ１）的单链ＲＮＡ：　ａ１）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列１，另一条链与序列表中序列１反向互补；　ｂ１）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列１的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列１反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　２）是下述ａ２）的双链ＲＮＡ或ｂ２）的单链ＲＮＡ：　ａ２）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列２，另一条链与序列表中序列２反向互补；　ｂ２）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列２的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列２反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　３）是下述ａ３）的双链ＲＮＡ或ｂ３）的单链ＲＮＡ：　ａ３）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列３，另一条链与序列表中序列３反向互补；　ｂ３）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列３的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列３反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　４）是下述ａ４）的双链ＲＮＡ或ｂ４）的单链ＲＮＡ：　ａ４）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列４，另一条链与序列表中序列４反向互补；　ｂ４）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列４的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列４反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　５）是下述ａ５）的双链ＲＮＡ或ｂ５）的单链ＲＮＡ：　ａ５）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列５，另一条链与序列表中序列５反向互补；　ｂ５）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列５的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列５反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　６）是下述ａ６）的双链ＲＮＡ或ｂ６）的单链ＲＮＡ：　ａ６）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列６，另一条链与序列表中序列６反向互补；　ｂ６）通过连接序列将核苷酸序列为序列表中序列６的单链ＲＮＡ分子和核苷酸序列与序列表中序列６反向互补的单链ＲＮＡ分子连接起来获得的重组单链ＲＮＡ分子；所述连接序列为ＴＴＣＡＡＧＡＧＡ；　７）是下述ａ７）的双链ＲＮＡ或ｂ７）的单链ＲＮＡ：　ａ７）其一条链的核苷酸序列为序列表中序列７，另一条链与序列...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张雅鸥，孔祥復，胡祥，李国喜，张锦芳，谢伟东，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，深圳市北科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]