抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用技术

本发明专利技术抗日本血吸虫单抗ＮＰ１１－４嵌合Ｆａｂ抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及制备血吸虫病治疗药物领域。应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单抗ＮＰ１１－４，利用基因工程技术提取杂交瘤细胞株总ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增Ｖ↓［Ｈ］、Ｖ↓［Ｌ］基因，将鼠源Ｖ↓［Ｈ］、Ｖ↓［Ｌ］分别与人ＩｇＧ↓［１］的Ｃ↓［Ｈ１］、Ｃ↓［Ｌ］通过ＰＣＲ扩增Ｆｄ及全长Ｌ，再利用重叠延伸ＰＣＲ以Ｆｄ和Ｌ基因为模板扩增嵌合Ｆａｂ基因，将嵌合Ｆａｂ基因与载体ｐＣｏｍｂ３ＸＳＳ酶切、连接，克隆至大肠杆菌Ｔｏｐ１０Ｆ’，诱导目的蛋白可溶性表达。表达的抗日本血吸虫单克隆抗体ＮＰ１１－４嵌合Ｆａｂ抗体Ｎ端从第１个氨基酸到第２１５个氨基酸为嵌合Ｆａｂ抗体的Ｌ链，从第２１６个氨基酸到第４８８个氨基酸为嵌合Ｆａｂ抗体的Ｆｄ段，两者之间由二硫键相连，嵌合Ｆａｂ抗体全长４８８个氨基酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种抗日本血吸虫单抗NPll-4嵌合Fab抗体及其制备方法、 应用，是利用基因工程技术，制备抗日本血吸虫嵌合Fab抗体。嵌合Fab可变区 基因片段来自定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛 蚴膜的单克隆抗体NPll-4，利用基因工程技术扩增轻链、重链可变区基因，再 分别将重链可变区基因Vh与人IgG,的CH1、轻链可变区基因Vl与人IgG,的Cl 通过PCR扩增Fd及全长L，再将Fd及全长L通过重叠延伸PCR扩增出嵌合 Fab基因片段，嵌合Fab基因与载体pComb3XSS连接，构建出嵌合Fab的原核 表达载体，在大肠杆菌ToplOF，中表达嵌合Fab抗体，用于制备日本血吸虫病的 治疗药物或制备抗日本血吸虫免疫毒素。本专利技术涉及抗体工程技术和血吸虫病的 治疗药物领域。
技术介绍
危害人体的血吸虫主要有日本血吸虫、埃及血吸虫和曼氏血吸虫三种，主要 分别分布于亚洲(东部和南部)、非洲和南美洲广大地区，患病人数约2亿左右。 在我国流行的是日本血吸虫病，分布在长江流域及其以南的十二个省、市、自治 区。解放时全国约有一千余万患者， 一亿人口受到本病威胁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗日本血吸虫单抗ＮＰ１１－４嵌合Ｆａｂ抗体，即抗日本血吸虫单克隆抗体ＮＰ１１－４嵌合Ｆａｂ抗体Ｎ端从第１个氨基酸到第２１５个氨基酸为嵌合Ｆａｂ抗体的全长Ｌ链，从第２１６个氨基酸到第４８８个氨基酸为嵌合Ｆａｂ抗体的Ｆｄ段，两者之间由二硫键连接，全长４８８个氨基酸，其氨基酸序列为：　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｙ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯振卿，顾春艳，朱进，李红，任勇亚，张慧林，管晓虹，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]