一种制备原生质体的方法技术

一种制备植物原生质体的方法，包括以下步骤：　（１）用０．５－１Ｍ的甘露醇溶液处理植物细胞，然后收集细胞；　（２）用酶解液酶解步骤（１）收集的细胞；所述酶解液为水溶液，溶质为如下终浓度的物质：质量百分含量为１％－２％的纤维素酶；质 量百分含量为０．２％－０．５％的离析酶；１－３ｍｇ／ｍｌ的脂肪酸甲酯磺酸钠；１－５ｍｇ／ｍｌ的牛血清白蛋白；４００－５００ｍＭ甘露醇；１－５ｍＭ　ＣａＣｌ↓［２］；所述酶解液的ｐＨ值为５．５－５．８；　（３）在经过步骤（２）处理的体 系中加入Ａ溶液，除去未酶解的细胞凝块后进行离心处理，收集沉淀，即得到植物原生质体；所述Ａ溶液为水溶液，溶质为如下终浓度的物质：１００－２００ｍＭ　ＮａＣｌ，１００－１５０ｍＭ　ＣａＣｌ↓［２］，２－１０ｍＭ　ＫＣｌ，５－１０ｍＭ葡萄糖 ，１－３ｍＭ脂肪酸甲酯磺酸钠；所述Ａ溶液的ｐＨ值为５．５－５．８。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。技术背景BY2细胞(Bright Yellow-2)是由烟草的叶肉细胞制备得到的一个悬浮细胞体 系。该细胞系生长速度快，可进行规模化培养，生长条件容易控制，目前被广泛的 用来进行植物细胞生物学研究，也被誉为是高等植物的"Hela"细胞。同时由于BY2 细胞没有叶绿体的自发荧光，因此可以方便的用于蛋白的亚细胞定位分析。利用荧光蛋白融合进行蛋白的亚细胞定位和动态分析对于研究蛋白的生物学 功能至关重要。目前利用稳定转化的方法转化BY2悬浮细胞系或者拟南芥植株，通 常需要几个月的时间。通过制备原生质体和PEG介导的瞬时转化来进行相关的研究 则可以大大縮短研究所需时间，提高效率。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效制备植物原生质体，并且重复性好的简便方法。 本专利技术所提供的制备植物原生质体的方法，包括以下步骤(1) 用0. 5-1M的甘露醇溶液处理植物细胞，然后收集细胞；(2) 用酶解液酶解步骤(1)收集的细胞；所述酶解液为水溶液，溶质为如下 终浓度的物质质量百分含量为1%-2%的纤维素酶；质量百分含量为0.2%-0.5%的 离析酶；l-3mg/ml的脂肪酸甲酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备植物原生质体的方法，包括以下步骤：　（１）用０．５－１Ｍ的甘露醇溶液处理植物细胞，然后收集细胞；　（２）用酶解液酶解步骤（１）收集的细胞；所述酶解液为水溶液，溶质为如下终浓度的物质：质量百分含量为１％－２％的纤维素酶；质量百分含量为０．２％－０．５％的离析酶；１－３ｍｇ／ｍｌ的脂肪酸甲酯磺酸钠；１－５ｍｇ／ｍｌ的牛血清白蛋白；４００－５００ｍＭ甘露醇；１－５ｍＭ　ＣａＣｌ↓［２］；所述酶解液的ｐＨ值为５．５－５．８；　（３）在经过步骤（２）处理的体系中加入Ａ溶液，除去未酶解的细胞凝块后进行离心处理，收集沉淀，即得到植物原生质体；所述Ａ溶液为水溶液，溶质为如下终浓度的物质：１００－２００...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林金星，王锋，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：11