一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，属于动物模型构建技术领域，其包括以下步骤：S1)对动物进行颈动脉套管手术，构建动脉粥样硬化型动物；S2)动物颈动脉套管手术至少8周后，给予动物慢性不可预知温和刺激，给予动物慢性不可预知温和刺激的时间至少为9天；动物的食物为高脂饲料。本发明专利技术构建的动脉粥样硬化型肝郁证动物有利于AS易损斑块的早期识别、中药新药的研发和AS的防治。

Construction of an atherosclerotic liver stagnation syndrome animal

【技术实现步骤摘要】
一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法
本专利技术属于动物模型构建
，尤其涉及一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法。
技术介绍
目前，尚无动脉粥样硬化病(AS)和肝郁证相结合的动物模型。现有的肝郁证动物模型的复制方法存在以下一些问题：1、在已复制的动物模型身上，的确有一些客观指标明显高于正常组，然而这些指标是否可以代表肝郁证的实质，甚至用于诊断肝郁证，尚不能给予肯定；2、现有动物模型之中，一些造模方法与肝郁证的发病机制尚存在一定出入，如很多患者出现肝郁证，并不是因为受到激怒刺激，也不是因为应用某些激素的干扰，所以利用这样方法复制的模型并不符合实际；3、模型构建方法存在将中医肝脏与西医肝脏的概念混为一谈，甚至有些学者将肝毒性药物注入大鼠体内，造成肝细胞损伤，这显然与肝郁证的实质相去甚远；4、关于肝郁证与抑郁症之间的关系，很多学者往往容易将两者混淆，两者无论在症状、中枢神经递质、内分泌系统变化上均有较多不同之处；5、另外，肝郁证其实是一个较大的范畴，其下也有许多小的证型，在造模过程中也应有所区分；而现今的造模方法中，很多只提及肝郁证，但具体是哪一种疾病的肝郁证目前尚无报道。动脉粥样硬化是由多种因素共同作用引起的，发病机制复杂，目前尚未完全阐明；动脉粥样硬化严重威胁着人类健康生活。因此，有必要研发出一种动脉粥样硬化肝郁证动物模型的构建方法，认知外源性情志刺激对AS斑块易损性的影响，深化易损斑块中医病机的认识和研究；这对AS易损斑块的早期识别、中药新药的研发和AS的防治具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，构建的动脉粥样硬化型肝郁证动物有利于AS易损斑块的早期识别、中药新药的研发、AS的防治。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，其包括以下步骤：S1)对动物进行颈动脉套管手术，构建动脉粥样硬化型动物；S2)动物颈动脉套管手术至少8周后，给予动物慢性不可预知温和刺激(chronicunpredictablemildstimulation，CUMS)，给予动物慢性不可预知温和刺激的时间至少为9天；动物的食物为高脂饲料。本专利技术充分抓住肝郁证乃是情志抑郁、所思不遂为主要病因引起的一类病证，在构建动物模型时，应当“投其所不好”才能引起肝气郁结。基于情志刺激与易损斑块的中西医理论认识，采取慢性不可预知温和刺激的方法来复制中医“肝郁证”模型，同时结合传统高脂饮食和动脉套管手术的方法，建立动脉粥样硬化型肝郁证动物。作为上述技术方案的改进，所述高脂饲料中脂肪和胆固醇的质量百分含量分别为21％和0.15％。作为上述技术方案的改进，所述动物为小鼠。作为上述技术方案的改进，慢性不可预知温和刺激包括以下方式：S21)让动物在倾斜45。的饲养笼中保持6h；S22)用水浇湿饲养笼的垫料，动物放置在饲养笼中的时间为6h；S23)将动物置于暗箱中，每隔7min交换一次明暗灯光(明暗灯光指的是有光和黑暗)，并用110db的白噪音刺激动物，持续2h；S24)从晚上七点到隔天的早上七点，将动物置于灯光下过夜；S25)先将每只动物单独放置在饲养笼中4h，然后将多只动物放置在同一个饲养笼2h；S26)禁食24h；S27)禁水24h；S28)纱布包住动物尾巴后，夹住距离动物尾根1～1.5cm处，持续15min；S29)强迫动物游泳6min，水的温度为21～23℃。作为上述技术方案的进一步改进，在所述S2)步骤中，小鼠颈动脉套管手术8周后的第一天，让小鼠在倾斜45。的饲养笼中保持6h；第二天，用水浇湿饲养笼的垫料，小鼠放置在饲养笼中的时间为6h；第三天，将动物置于暗箱中，每隔7min交换一次明暗灯光，并用110db的白噪音刺激动物，持续2h；第四天，从晚上七点到隔天的早上七点，将小鼠置于灯光下过夜；第五天，先将每只小鼠单独放置在饲养笼中4h，然后将多只小鼠放置在同一个饲养笼中2h；第六天，禁食24h；第七天，禁水24h；第八天，纱布包住小鼠尾巴后，夹住距离小鼠尾根1～1.5cm处，持续15min；第九天，强迫小鼠游泳6min，水的温度为21～23℃。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，本专利技术从中医肝郁证形成机理、情志致病的病因学角度出发，结合西医对慢性心理应激反应调节机制的理论认识，在传统的动脉套管和高脂饮食的基础之上，结合自行改良的CUMS多重情志刺激方法，建立真正符合临床实际和证候特点的动脉粥样硬化型肝郁证动物；本专利技术构建的动脉粥样硬化型肝郁证动物有利于AS易损斑块的早期识别、中药新药的研发和AS的防治。具体实施方式为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例和附表对本专利技术作进一步说明。实施例1本实施例提供一种动脉粥样硬化型肝郁证小鼠的构建方法，其包括以下步骤：S1)实验小鼠均全程高脂饲料喂养(脂肪质量百分含量21％+胆固醇质量百分含量0.15％)，小鼠均于实验初行左颈总动脉套管(缩窄性硅胶管)，以诱发颈总动脉粥样硬化病变，构建AS斑块小鼠；小鼠实验过程均遵循动物伦理学规范；S2)动物颈动脉套管手术8周后，第一天，让小鼠在倾斜45。的饲养笼中保持6h；第二天，用水浇湿饲养笼的垫料，小鼠放置在饲养笼中的时间为6h；第三天，将动物置于暗箱中，每隔7min交换一次明暗灯光，并用110db的白噪音刺激动物，持续2h；第四天，从晚上七点到第二天的早上七点，将小鼠置于灯光下过夜；第五天，先将每只小鼠单独放置在饲养笼中4h，然后将多只小鼠放置在同一个饲养笼中2h(观察小鼠，如果发生斗殴则人为分开)；第六天，禁食24h；第七天，禁水24h；第八天，纱布包住小鼠尾巴后，用重量约800g的塑料夹夹住距离小鼠尾根1～1.5cm处，持续15min；第九天，强迫小鼠在装有水的水桶里游泳6min；水的温度为21～23℃，水深15cm，水桶为35cm×25cm；结束后用毛巾擦干小鼠。实施例21)对本申请制备的动脉粥样硬化型肝郁证小鼠进行体征进行观察，以正常小鼠为参照，观察结果如表1所示。2)小鼠体质量增加及血脂代谢的变化按照数字表法将ApoE-/-小鼠随机分为正常组、高脂组、肝郁组，另取10只同周龄近交系C57BL/6/J小鼠设为空白组；空白对照组和正常组给予普通饲料喂养；高脂组全程给予含脂肪21％、胆固醇0.15％的西方膳食饲料喂养(Co60γ灭菌照射处理，北京科澳协力有限公司)，不作其他干预；肝郁组为本申请制备的动脉粥样硬化型肝郁证小鼠。如表2所示，比较小鼠实验前后的体重发现，肝郁组小鼠体重增加最多，其次是高脂组、正常组，空白组小鼠的体重增加最少。与空白组相比，正常组、高脂组、肝郁组的体质量增加值、TC(血清胆固醇)、TG(甘油三酯)和LDL-C(低密度脂蛋白)含量升高，HDL-C(高密度脂蛋白)含量下降，差异有统计学意义(p<0.05)；与正常组比较，高脂组、肝郁组体质量增加值、TC、TG和LDL-C含量升高，HDL-C含量下降，差异具有统计学意义(p<0.05)；肝郁组与高脂组相比，体质量增加值、TC、TG和LDL-C含量升高，HDL-C含量下降，差异具有统本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)对动物进行颈动脉套管手术，构建动脉粥样硬化型动物；S2)动物颈动脉套管手术至少8周后，给予动物慢性不可预知温和刺激，给予动物慢性不可预知温和刺激的时间至少为9天；动物的食物为高脂饲料。

【技术特征摘要】
1.一种动脉粥样硬化型肝郁证动物的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)对动物进行颈动脉套管手术，构建动脉粥样硬化型动物；S2)动物颈动脉套管手术至少8周后，给予动物慢性不可预知温和刺激，给予动物慢性不可预知温和刺激的时间至少为9天；动物的食物为高脂饲料。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述高脂饲料中脂肪和胆固醇的质量百分含量分别为21％和0.15％。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述动物为小鼠。4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，慢性不可预知温和刺激包括以下方式：S21)让动物在倾斜45°的饲养笼中保持6h；S22)用水浇湿饲养笼的垫料，动物放置在饲养笼中的时间为6h；S23)将动物置于暗箱中，每隔7min交换一次明暗灯光，并用110db的白噪音刺激动物，持续2h；S24)从晚上七点到隔天的早上七点，将动物置于灯光下过夜；S25)先将每只动物单独放置在饲养笼中4h，然...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁东辉，黄曼萍，
申请(专利权)人：南方医科大学珠江医院，
类型：发明
国别省市：广东,44