一种含有CpG序列的PRRSV ORF5基因核酸疫苗的制备方法技术

本发明专利技术为一种含有ＣｐＧ－ＯＤＮ和表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）ＯＲＦ５基因的核酸疫苗的制备方法。该方法是通过构建含ＣｐＧ基序和ＰＲＲＳＶ　ＯＲＦ５的真核重组表达质粒ＣｐＧ－ｐＶＡＸ１－ＯＲＦ５，经酶切鉴定和序列测定，将重组质粒转染ＣＯＳ－７细胞，经间接免疫荧光试验证实ＣｐＧ－ｐＶＡＸ１－ＯＲＦ５可表达ＰＲＲＳＶ　ＧＰ５蛋白。免疫ＳＰＦ小鼠和猪，检测鼠和猪的特异性抗体滴度、脾Ｔ淋巴细胞亚群数量（ＣＤ４＋和ＣＤ８＋）以及淋巴细胞增殖反应（ＭＴＴ法）水平。试验结果表明本试验构建的含ＣｐＧ基序真核重组表达质粒ＣｐＧ－ｐＶＡＸ１－ＯＲＦ５能诱导小鼠和猪产生针对ＰＲＲＳＶ的体液免疫与细胞免疫。有效地提高猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）基因免疫的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因疫苗使用的佐剂和其制备方法，具体是一种含有CpG序列的 PRRSV 0RF5基因核酸疫苗。2
技术介绍
自从上世纪20年代以来，许多物质被尝试作为免疫佐剂，但只有铝胶佐剂 获得人类疫苗的许可，并大量用于猪疫苗。它作为抗原的储存库和载体，缓慢 释放抗原从而延长诱导机体的体液免疫反应，但缺点是仅诱导Th2体液免疫反 应，抗体以IgGl型为主，无TCL反应。油佐剂和弗氏完全佐剂虽能明显提高免 疫应答能力，但在实际应用中常出现不良反应，如注射部位肿胀、疼痛、发烧， 或发生过敏等，仅限用于实验室动物试验。206佐剂是目前商品化的高效动物疫 苗油佐剂，已广泛使用于动物疫苗中，实践证实是可靠的、有效的和安全的， 但需要进口，价格较高。基因疫苗(gene vaccine)是近年来随着基因治疗而发展起来的第三代疫 苗。它是将编码某一特定保护性抗原蛋白的外源基因与真核表达载体进行重组 后，直接导入动物体内，利用免疫原基因在宿主体内表达出抗原蛋白质引起机 体的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。与常规疫苗相比，基因疫苗具 有如下优点免疫效果好；不散毒，无污染；保护性免疫持续时间长；方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有ＣｐＧ序列的ＰＲＲＳＶ　ＯＲＦ５基因核酸疫苗的制备方法，其特征在于制备步骤如下：　１）选用ＣｐＧ－ＯＤＮ序列引物　Ａ：５’－ＣＴＣＡＴＣＧＡＴＣＣＴＡＴＣＧＡＴＣＣＴＡＴＣＧＡＴＣＣＴＡＴＣＧＡＴＣＣＴＡＴＣＧＡＴＣＣ ＴＡＴＣＧＡＴＧＧＧＣＣ－３’　Ｂ：５’－ＣＡＴＣＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＡＴＧＡＧＧＧＣＣ－３’　２）ＰＣＲ扩增ＯＲＦ５基因　设计扩增ＯＲＦ５基因的引物 为：　Ｐ５ｓ：５’－ＡＡＴＣＴＡＧＣＴＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＴＧＧＡ－３’，　Ｐ５...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王金宝，温建新，任慧英，吴家强，李俊，张秀美，周顺，宋春阳，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]