一种从土豆中快速提纯酪氨酸酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种从土豆中快速提纯酪氨酸酶（ＴＹＲ）的方法，步骤包括：（１）对土豆进行粉碎匀浆、盐析、沉淀溶解和透析提取ＴＹＲ粗酶；（２）利用ＦＰＬＣ的凝胶分子筛和／或阴离子交换层析提纯ＴＹＲ；（３）用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外分光光度计酶活测定对ＴＹＲ进行表征。该方法快速、简便、廉价，而且纯化的ＴＹＲ活性较高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种的从土豆中快速提纯酪氨酸酶的方法，包括下列步骤：　（１）土豆浸泡在０．００５Ｍ～０．４Ｍ乙酸钠缓冲液（ｐＨ５．０－６．０）中高速匀浆１～５ｍｉｎ，过滤，加入３０％～８０％硫酸铵溶液进行盐析，再用乙酸钠缓冲液溶解沉淀，０．００５Ｍ～ ０．０４Ｍ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ６．５～７．５）透析得ＴＹＲ粗酶液；　（２）利用ＦＰＬＣ的分子筛凝胶柱层析，用Ｓｅｐｈｏｄｅｘ　Ｇ７５分子筛凝胶柱，洗脱液：０．００５Ｍ～０．０５Ｍ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ６．０～７ ．５），平衡：２个柱床，洗脱：１～２个柱床，流速：０．２５～０．７５ｍｌ／ｍｉｎ，进行提纯；　（３）和／或利用ＦＰＬＣ的ＨｉＴｒａｐ　Ｑ　ＦＦ离子交换柱层析，用洗脱液Ａ为０．００１Ｍ～０．０１Ｍ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ６． ０～７．５），洗脱液Ｂ为０．００１Ｍ～０．０１Ｍ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ６．５～７．５）＋１Ｍ～２Ｍ的ＮａＣｌ，平衡为１０～２５个柱床，冲洗为２～５个柱床，洗脱梯度为洗脱液Ｂ在５～１０个柱床内保持３％～７％，然后在５个柱床内保持１０％～１５％，然后在５～１０个柱床内保持２０％～２５％，然后在５～１０个柱床内保持４０％～５０％，流速为０．７５～１ｍｌ／ｍｉｎ，进行提纯；　（４）将阴离子层析和分子筛凝胶层析得到的收集峰用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）凝胶电泳 和紫外分光光度法酶活表征。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱利民，柴艳倩，董唯静，李树白，张玉高，周立明，
申请(专利权)人：东华大学，广东溢达纺织有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]