用于亲和纯化的工程蛋白酶及融合蛋白的加工制造技术

技术编号:1736808 阅读:170 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及鉴定能够以高亲和力结合相应蛋白酶的蛋白酶前结构域。本发明专利技术的前结构域融合到另一蛋白以形成蛋白酶前结构域融合蛋白。融合蛋白中存在蛋白酶前结构域蛋白使得可以通过用相应的蛋白酶温育而容易地和选择性地纯化第二蛋白。(*该技术在2024年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于亲和纯化的工程蛋白酶及融合蛋白的加工
技术介绍
专利
本专利技术涉及纯化方法,和更具体地涉及包含耙蛋白和蛋白酶前结 构域蛋白的融合蛋白,其中前结构域蛋白与相应的蛋白酶或其变体具 有高度亲和力从而以提供随后用于回收靶蛋白的蛋白酶结合复合物。
技术介绍
重组DNA技术已经促进了用于医药和生物技术多种应用的蛋白 的表达。然而,重组蛋白的纯化通常是复杂和难以解决的。大规模, 经济的纯化蛋白通常包括由细胞培养物,比如通过插入含有所述蛋白 基因的重组质粒基因工程化产生目的蛋白的细菌细胞系而产生蛋白。 从供应给细胞的化合物的混合物及从细胞自身的副产物中分离需要的 蛋白到足以用作人药物的纯度构成艰巨的挑战。用于从细胞碎片纯化蛋白的方法最初取决于蛋白表达的位置。一 些蛋白可以直接从细胞分泌到周围生长介质;其它的蛋白则在细胞内 制备。对于后一种蛋白,纯化过程的第一步包括裂解细胞,可以通过 各种方法完成,包括机械剪切,渗透压冲击或酶处理。这样的破裂将 细胞的全部内容物释放进入组织匀浆,此外产生由于其较小而难以除 去的亚细胞碎片。这些通常通过差速离心或过滤除去。由于在蛋白生 产过程中细胞的自然死亡和细胞内宿本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码融合蛋白的核酸构建物,其中该构建物包括可操作连接到前结构域蛋白编码序列的目的蛋白的编码序列,其中前结构域蛋白具有与其相应的蛋白酶或其变体增加的亲和力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:菲利普N布赖恩
申请(专利权)人:马里兰大学生物技术研究所
类型:发明
国别省市:US[美国]

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