犬S100β蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种犬Ｓ１００β蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法，包括提取犬坐骨神经总ＲＮＡ、ＲＴ－ＰＣＲ扩增、连接、犬Ｓ１００βｃＤＮＡ序列的测定、设计Ｓ１００β表达载体的引物构建Ｓ１００β重组原核表达质粒、感受态细胞的制备及重组质粒的转化、重组克隆的筛选及酶切鉴定、目的蛋白的表达及多克隆抗体制备等步骤。本发明专利技术以ＰＧＥＸ－４Ｔ－１为基础所构建的体外Ｓ１００β表达系统在ＢＬ２１中能高效地表达目的蛋白，进一步以成熟的方法进行纯化，可方便地获得大量的ＧＳＴ－Ｓ１００β融合蛋白。另外，经此蛋白免疫大耳兔所制备的兔抗犬Ｓ１００β血清滴度高、特异好，完全可以满足相关实验的需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种犬siooe蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法。
技术介绍
S100蛋白家族是广泛分布于不同组织的一类分子量(10-13 kDa)较 小的酸性钙结合蛋白，具有EF手型(螺旋-环-螺旋)钙离子结合区，目 前发现至少包含21个成员。S100e就是S100蛋白家族最经典的一员。siooe蛋白特异性地存在于脑组织的胶质细胞胞质中，包括星形神经胶 质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞等，也存在于神经元的亚群和胶质以及外周神经系统的雪旺氏细胞(Schwanncell)中。研究显示S100P作 为钙传感器蛋白，具有广泛的生物学活性，如①调节蛋白激酶C和 钙调蛋白的磷酸化及RNA的合成，从而调节细胞的能量代谢；②作为 细胞内正常成分参与细胞内外钙离子水平的调节；③增强ATP酶的活 性；④通过神经胶质细胞的旁分泌和自分泌，作用于神经元和神经胶质 细胞，从而促进神经的生长和损伤后修复；⑤激活脑果糖1, 6 -二磷酸 醛缩酶和葡萄糖磷酸变位酶，促进神经的生长和损伤后的修复；⑥作用于光感受器外膜上的鸟苷酸环化酶。由此可见，siooe在细胞内和细胞外都具有广泛的生物学效应。市场上多是针对人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种犬Ｓ１００β蛋白的体外表达方法，其特征是：包括下列步骤：　１）取正常毕格犬坐骨神经，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取坐骨神经总ＲＮＡ；　２）ＲＴ－ＰＣＲ扩增：用逆转录试剂盒及总ＲＮＡ进行逆转录反应，合成ｃＤＮＡ第一链，再以合成的ｃＤＮ Ａ为模板，进行犬Ｓ１００β基因的ＰＣＲ扩增；　３）连接：用克隆载体试剂盒，将ＰＣＲ产物连接到克隆载体中；　４）犬Ｓ１００βｃＤＮＡ序列的测定：将已克隆在克隆载体中的Ｓ１００β　ｃＤＮＡ进行测序，测序结果其序列与基因库中的序列完全 一致；　５）设计Ｓ１００β表达载体的引物，构建Ｓ１００β重组原核表达质粒：以上述测序正确的质粒为...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁斐，刘梅，刘炎，蒋茂荣，吴坚，顾晓松，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]