青枯菌新胞外蛋白PopW的基因工程应用制造技术

本发明专利技术公开了一个青枯菌新胞外蛋白ＰｏｐＷ的基因工程应用，属于基因工程技术领域。设计引物，以基因组ＤＮＡ为模板，使用高保真ｐｆｕ聚合酶扩增ＰｏｐＷ的编码区序列，产物连接至蛋白表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）载体，然后转化至大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行蛋白表达，用镍柱纯化ＰｏｐＷ蛋白。亚细胞定位研究表明，该蛋白定位在植物的细胞壁上。在温室条件下，ＰｏｐＷ还能诱导烟草抗烟草花叶病毒的侵染。说明ＰｏｐＷ可诱导烟草系统获得抗性，为以后作为生物农药防治病害提供了很大的可能，具有重要的社会效益和经济效益。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
青枯菌ＺＪ３７２１新胞外蛋白ＰｏｐＷ的基因工程应用，包括：　１）ｐｏｐＷ基因的克隆　青枯菌ＺＪ３７２１在３０℃条件下培养于ＭＢＧ培养基，待菌株生长到对数期，按照细菌基因组提取试剂盒操作说明提取青枯菌基因组ＤＮＡ；　设计扩增 ｐｏｐＷ基因引物ｐｏｐＷ１：　上游引物Ｆ：ＣＧＣＡＴＡＴＧＴＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＴＧＡＴＣＧＣ　Ｎｄｅ　Ⅰ　下游引物Ｒ：ＧＣＡＡＧＣＴＴＧＣＣＣＧＡＧＴＡＧＧＣＣＴＴＧＴＡＧ　Ｈｉｎｄ　Ⅲ　或扩增ｐｏｐＷ基因引 物ｐｏｐＷ２：　上游引物Ｆ：ＡＴＧ　ＴＣＣ　ＡＴＣ　ＣＡＧ　ＡＴＴＧＡＴ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红霞，李建刚，郭坚华，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]