胆固醇氧化酶发酵制备工艺制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域．将球孢链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ）Ｃ－４１２．经过培养、发酵得到有酶活的菌体，通过分离、提取、精制制备胆固醇氧化酶．该酶的稳定性好，可以保存一年半时间．该酶试剂可供临床化验，用于检测血清中胆固醇，检测准确率高，数据稳定．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物工程
胆固醇氧化酶在生理条件下能够氧化胆固醇成为胆甾-4-烯-3-酮及过氧化氢。由于它对胆固醇有专一性反应，因此利用此反应及其他辅助反应，可以测定血清中游离胆固醇的含量，反应过程如下胆固醇+O2(胆固醇氧化酶)/() 胆甾-4-烯-3-酮+H2O22H2O2+4-氨基安替比林+酚 (过氧化氢酶)/() 醌亚胺色素+4H2O以上反应原理现在已经普遍应用于临床诊断，是测定人血清中胆固醇含量的快速、灵敏、正确的方法。在上述反应中，于37℃时，每分钟能把1微克分子胆固醇按上述反应转化为胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢的酶量定为1酶活单位。1948年Turfit指出Proactinomyces erythropelia菌株能分解胆固醇为4-甾醇烯-3酮的代谢物，1973年W.Richmard由Nocardia菌属中分离得到胆固醇氧化酶，其后H。M。Flegg从细菌中筛选获得胆固醇氧化酶，因而从70年代开始，美、德、日本先后从细菌、诺卡氏菌、霉菌中生产胆固醇氧化酶，以替代化学试剂应用于临床，具有准确、快速的优点，但是，在多烯类的产生菌中生产胆固醇氧化酶至今未见报导。本专本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用发酵工程制备胆固醇氧化酶的工艺，本专利技术的特征在于将球孢链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ）Ｃ—４１２的菌种，经配方为４％葡萄糖、２％黄豆饼粉水解液、０．５％酵母膏、０．５％可溶性淀粉、０．２％碳酸钙的种子培养基１００毫升置三角瓶中，于旋转摇床２２０转／分，２８℃培养４８—７２小时，再经配方为３％黄豆饼粉水解液、１％葡萄糖、０．５％酵母膏、２．０％甘油、０．１％Ｋ↓〔２〕ＨＰＯ↓〔４〕、０．１％碳酸钙的发酵培养基、２８℃２４—３６小时，分离菌丝体或经配方为１—４％葡萄糖、０．１—１％可溶性淀粉、１—５％豆饼粉水解液。０．５％—２％酵母粉，Ｌ—１００．１—１０％诱...

【技术特征摘要】
书 1 17 2、按权利要求 2、按权利要求11所述诱导剂L 所述的那种利用发-10为…… 酵工程制备胆固醇氧化酶的工艺，其特征是诱导剂L-10……权利要求1.一种利用发酵工程制备胆固醇氧化酶的工艺，本发明的特征在于将球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)C-412的菌种，经配方为4%葡萄糖、2%黄豆饼粉水解液、0.5%酵母膏、0.5%可溶性淀粉、0.2%碳酸钙的种子培养基100毫升置三角瓶中，于旋转摇床220转/分，28℃培养48-72小时，再经配方为3%黄豆饼粉水解液、1%葡萄糖、0.5%酵母膏、2.0%甘油、0.1%K2HPO4、0.1%碳酸钙的发酵培养基、28℃24-36小时，分离菌丝体或经配方为1-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐月美，杨光礼，
申请(专利权)人：国家医药管理局上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]