植物种的转化和外源基因的表达制造技术

本发明专利技术涉及通过将子叶的带叶分枝培养物与外源基因共培养转化，随后由转化细胞再生出植物体，从而产生能表达外源基因的植物体以产生植物种，特别是利用一种受到控制的农业土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ－ｒｉｕｍ）转化系统来转化蕃茄带叶分枝培养物，而后使转化的蕃茄组织再生成植物体。该土壤杆菌质粒已于一九八六年三月廿日保藏在ＡＴＣＣ，保藏号为６７１１８。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种改良植物的基因型和表型的方法，该方法对植物子叶组织，特别是对用一种由植物饲养细胞制备的培养基预处理的子叶引入一种农业土壤杆菌(Agrobacterium)的转化系统。该方法能高效地用于转化植物以达到增强性能和/或提供新的表型。植物育种方法的应用一直受到限制是由于很难在植物种间进行基因转移，因此开发一种方法用于植物种的遗传工程可能是具有吸引力的，但是植物细胞与其他类型的细胞对转化系统的要求实质上是很不相同的。首先，植物细胞不同于单细胞微生物，它们的增殖率低;其次，对于生存、增殖和再生来说，植物细胞对它们所处的环境极为敏感;第三，为了确定外源基团是否已起作用地被整合在植物细胞内，需要证实再生植株是否已表达了基因产物;最后，使植物细胞具有硬质的细胞壁进行遗传工程将更加困难。由于在植物细胞操作和基因有效表达的证实之间有着相当长的时间间隔，因此，在转化、细胞生长及再生植株的每个阶段要求实现高效率是必不可少的。另外还应考虑到使特定技术和该技术中所利用的材料与特定植物种之间的相匹配问题。此外，为了从转化细胞的愈伤组织获得再生植株，还需进一步机虑转化培养物的连续手工操作。A.L.Gu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效转化植物细胞的方法，将ＤＮＡ引入上述的植物细胞，该ＤＮＡ能在上述细胞中复制和转录，该方法包括：在植物细胞所限定的培养基中培育子叶细胞，并与含有一种构建体、并被改装和转化的农业土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）细胞共培养。这种 构建体包括一个Ｔ－ＤＮＡ的边界和能够在植物细胞内转录的一个有价值的基因，此构建体还能够被转移至植物细胞内，以后整合进入该植物细胞的基因组。利用上述构建体能够被整合进入该植物细胞基因组，以便提供被转化的植物细胞。除去上述转化植物细胞的细菌 ，在再生培养基中培育该转化的植物细胞，以产生带叶的分枝，以及转移带叶分枝到生根培养基中以产生小植物。

【技术特征摘要】
US 1986-6-10 872,5321.一种高效转化植物细胞的方法，将DNA引入上述的植物细胞，该DNA能在上述细胞中复制和转录，该方法包括在植物细胞所限定的培养基中培育子叶细胞，并与含有一种构建体、并被改装和转化的农业土壤杆菌(Agrobacterium)细胞共培养。这种构建体包括一个T-DNA的边界和能够在植物细胞内转录的一个有价值的基因，此构建体还能够被转移至植物细胞内，以后整合进入该植物细胞的基因组。利用上述构建体能够被整合进入该植物细胞基因组，以便提供被转化的植物细胞。除去上述转化植物细胞的细菌，在再生培养基中培育该转化的植物细胞，以产生带叶的分枝，以及转移带叶分枝到生根培养基中以产生小植物。2.根据权利要求1的方法，其中上述子叶细胞是通过完全无菌的条件下，得到萌发的无菌种子，形成伸出的子叶;以及将上述子叶至少切成两片，除去该种子的其他部分并挑选更靠近种子的那片子叶切片。3.根据权利要求1的一种方法，其中所说的限定培养基是指含有激素和维生素的软的琼脂培养基中，有每毫升104-1010细胞生长，这种培养基在培育上述子叶细胞时，至少前一天制备出来。4.根据权利要求1的一种方法，其中所说的植物细胞首先与细菌肉汤液体培养基中的上述土壤杆菌接触，随后将与土壤杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔安菲拉蒂，布鲁斯R托马斯，
申请(专利权)人：加利福尼亚基因公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]