反义寡核苷酸对血管内皮生长因子表达的抑制作用制造技术

一种抑制ＶＥＧＦ的反义寡核苷酸，它与表达哺乳动物ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ或双链ＤＮＡ相互补。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于抑制血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的反义寡核苷酸。血管内皮细胞生长因子(VEGF)也称为血管通透性因子(VPF)，是由各种各样的肿瘤和正常细胞合成并分泌的一种34-43KDa(主要形式为约45KDa)二聚体形式的二硫键连接的糖蛋白。Leung等人，Science，246，1306(1989)观察到三种VEGF转录物(长度分别为121，165和189个氨基酸)，这意味着涉及另一种拼接机理，最近，Houck等人发现具有长度为206个氨基酸的第四种VEGF转录物。Tischer等人，J.Biol.Chem.266，11947(1991)已经测出人的VEGF编码区是由8个外显子组成的。再者，该研究小组证实三种mRNA转录物(编码长度为121，165和189个氨基酸的肽)是另一种拼接方式产生的。已经在牛系统中鉴别出与121和165个氨基酸多肽相类似的转录物。Le-ung等人，文献同上。在啮齿动物系统-大鼠(Conn等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，2628(1989))，豚鼠(Sanger等人，Can-cer Res.50，1774(1990))，以及小鼠(Claffey等人，J.Biol.Chem.257，16317(1992)中也已经鉴定出对应于165个氨基酸的转录产物。Tischer等人(文献同上)报道了三种类型的人VEGF编码区的核酸序列。Claffey等人(文献同上)公开了鼠VEGF的序列。进行比较后结果显示VEGF分子具有85％以上的种间保守性。还没有鉴别出所有的以另一种方式拼接的VEGF分子，但基于种之间的保守性，应该在不久的将来可能做到。下面的讨论提供了几种与VEGF相关的病理状态，并且强调了VEGF作为治疗的潜在目标的重要性。糖尿病性视网膜病在美国，糖尿病性视网膜病是引起工作年龄的成年人(20-64岁)眼睛失明的最主要原因。在糖尿病期间，引发的一种并发症是视网膜静脉闭塞。这种静脉闭塞导致由于脉管壁扩张，出血(血渗到周围区域)，代表细胞渗出物(即细胞损伤)的“棉花”斑形成，以及扩伸到玻璃体中的视网膜新血管形成而形成微动脉瘤，导致出血。治疗糖尿病性视网膜病的经典方法是1)控制血液葡萄糖和血压以及2)盘状视网膜激光光凝固作用(PRP)。治疗方法#1可根据患病个体的努力情况推迟疾病的发作。治疗方法#2是非常有效的，但可导致其他出血以及对视力必需的关键区域(即小凹纤维)的损伤。有较少副作用的治疗该疾病的其他方法将是十分有价值的。最近的研究结果显示，在糖尿病患者的视网膜中VEGF蛋白水平增加，这意味着这种细胞因子/生长因子在该疾病中起着重要作用。下面所述的VEGF的特征提供了这样的证据它可能是糖尿病性视网膜病的一种重要调节子(1)VEGF的作用具有对内皮细胞的特异性；(2)已证明VEGF是促血管形成的并且是促有丝分裂的；(3)VEGF是一种分泌的分子；(4)VEGF诱导血管通透性；(5)VEGF是在缺氧条件下被诱导(即在视网膜静脉闭塞)。动脉粥样硬化斑的形成VEGF可能在动脉粥样硬化斑的演变过程中起作用。动脉粥样硬化显示一种状态，该状态中中等动脉和主动脉中出现了含有脂类的损伤。在美国，它是心肌和脑梗死的首要原因。内膜内的损伤，即动脉壁最里面层的损伤可分为两种形式脂肪条纹(早期)，以及纤维斑(较严重的)。这两种形式以充满脂类的巨噬细胞(衍生于血产生的单核细胞)以及平滑肌细胞为特征。纤维斑的另外的特征在于沉积了连接组织以及胆固醇晶体。这些损伤堵塞了血管的腔，减小了血流，导致局部缺血和坏死。研究已经证明，新血管的形成也可以出现于动脉粥样硬化损伤。这些患病区域的VEGF蛋白质的水平还没有测出，但已经证明单核细胞和巨噬细胞都表达VEGF。创伤愈合VEGF在保持创伤愈合的正常状态中也可能起重要作用。参见Brown等人，J.Exp.Med.176，1375(1992)。创伤愈合通常是对损伤或外伤产生受调节的应答。病灶的出血跟随着从血浆往外渗出(渗出)纤维蛋白原从而形成纤维蛋白凝胶或凝块。该起始基质由肉芽组织(粘连蛋白，胶原蛋白，蛋白聚糖)所替代并且最后形成瘢痕组织。另外，角质化细胞迁移并且形成外被以防止体液损失和细菌感染。创伤愈合的一个主要特性是在出血终止之后某段时间出现了脉管的通透性过高。另外，在该段时间内可检测到促血管形成活动。最近研究证明，位于伤口边界以及在伤口外被层中的角质化细胞产生VEGF。Brown等人，文献同上。该结果暗示VEGF可能对与伤口愈合相关的通透性过高和促血管生成活动起作用。与外科手术相关的异常的伤口愈合可导致产生并发症，例如瘢痕增生(过量胶原沉积)，瘢痕瘤形成(瘢痕组织入侵到周围正常组织中)，以及腹腔粘连。在肺纤维化形成期间和糖尿病(创伤不愈合)中出现与未受调控的创伤愈合相关的其他问题。据认为，VEGF在这些过程中也起着作用。肿瘤血管形成VEGF可能是一种肿瘤血管生成因子。Plate等人，Nature 359，845(1992)。血管生长是受严格调控的过程，该过程演化出了新血管。血管系统的形成对营养物和废物流至和流出组织和器官是必要的。较小的固体肿瘤(＜1-2mm)不需要广泛的血管系统而可生存，但代之以通过必需营养物扩散而得到营养物质。但是，为了使这些细胞群生长至大于几个毫米以上，需要其他血管生成。参见例如，Folkman，J.Natl.Cancer Inst.82，4(1990)。已经有人提示，抑制肿瘤血管生成可能是抵抗肿瘤生长以及防止发生对传统抗肿瘤治疗剂产生抗性的有效方案。Kerbel，BioEssays 13，31(1991)。Kim等人，Nature 362，841(1993)报道了特异于VEGF的单克隆抗体在体内抑制肿瘤生长。含有连接组织和血管系统的肿瘤基质实质上是肿瘤的“生命线”。正常组织的脉管系统有很好的组织形式，并且可应答代谢中的变化，而肿瘤基质中的组织形式较差，非常类似于伤口愈合期间的疤痕组织。肿瘤基质仅代表总的肿瘤(例如乳腺髓状癌)的一小部分或者以占总细胞群的80-90％存在(例如在结缔组织生成的癌)。肿瘤血管也与正常组织中的不相同，肿瘤血管对血浆和血浆蛋白的渗透性过高。而在正常组织中仅在伤口愈合期间可看到这样的渗透性，固体肿瘤无限期地保留这种渗透特性。尽管基质是肿瘤生长的必要成分，它也起着针对大分子(例如单克隆抗体)的障碍层的作用，从而需要足够量的这些大分子才可起到有效治疗剂的作用。在巨大肿瘤中，由于扩散空间大以及吸收到外周肿瘤细胞的血管周区域，抗体/大分子也不是有效的。因此，迫切需要另一种治疗化合物。正如所讨论的，VEGF是许多病理状态和过程的主要成分。研究证明，VEGF存在于肿瘤区域，其中出现毛细管生长，并且暗示VEGF可以引起导致血管生成的整个一系列事件的发生。相反，在正常组织中VEGF水平相当低。因此，对VEGF表达水平进行调节可能是治疗病理状况而不会明显影响正常组织的重要方法。例如，从早期讨论中得出对VEGF表达的抑制可以在下列方面起着重要作用(a)调节与糖尿病性视网膜病相关的视觉上的并发症，(b)调节动脉粥样硬化斑的形成，(c)控制涉及伤口愈合过程中的不受调节的活动，以及(d)阻止和改变本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里·S·鲁滨逊，
申请(专利权)人：海布里顿公司，
类型：发明
国别省市：