hTFIIIA基团制造技术

本发明专利技术提供了一种含有编码ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示氨基酸序列的碱基序列的ｈＴＦＩＩＩＡ基因，特别是含有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的碱基序列的ｈＴＦＩＩＩＡ基因。 该基因能表达相应的ｈＴＦＩＩＩＡ蛋白质，该基因和蛋白质用作转录调控因子，在遗传疾病如癌症或由转录控制的反常引起的其他疾病的诊断或鉴定中，以及其作用机理的分析中有用。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及编码人转录因子IIIA(下文称作hTFIIIA)。自从1980年首次从非洲蟾蜍属(xenopus)卵母细胞中以转录因子的形式纯化出TFIIA后，在Xenopus中进行了许多体内和体外研究以解释用所说的TFIIIA进行转录控制的机理。上述Xenopus TFIIIA对5S RNA基因转录的启动是必须的而且与5S基因的一个内部控制区域结合。Xenopus TFIIIA cDNA的核苷酸序列和相应的氨基酸序列已被报道。所说的基因编码9个锌指纹区(Cys2His2(C2H2)区域的重复)，该结构被当作一组DNA结合蛋白质所必须的区域。已构建了一个酵母基因，它编码与xenopus TFIIIA同源的一种蛋白质，也有相同的C2H2区域。进一步了解到，在人类，DNA结合转录因子，如人Wilms肿瘤基因WT1，人转录阻遏物YY1，人MYC-相联性锌指纹蛋白maz和SP1具有上述C2H2型指纹区。与Xenopus TFIIIA相反，关于hTFIIIA所知甚少。1989，从Hela细胞中纯化出一种hTFIIIA样蛋白质(35K Da蛋白质)并显示出与人5S RNA基因相互作用。但还没有报道hTFIIIA编码基团。因此，分离和提供一种hTFIIIA基因是本专利技术的目的。本专利技术的另一目的在于揭示hTFIIIA基因的核苷酸序列及相应的氨基酸序列以便解释人转录机制并提供其用途。由于他们深入研究的结果，本专利技术成功地分离出一种编码hTFIIIA的cDNA，测定了全部cDNA序列和相应的氨基酸序列，在各种组织中诱导了其表达并揭示了其在染色体上的位置。因此根据所得的发现，现已完成了本专利技术。因此，本专利技术提供了编码一种氨基酸序列(由SEQ ID NO1限定)的hTFIIIA。在本说明书的下文中，用于氨基酸，肽，碱基序列，核酸等的缩写使用按IUPAC和IUB以及在“含碱基序列和/或氨基酸序列的附图说明书指标”(日本专利局编)中所推荐的或在相关领域通用的缩写形式。本专利技术的hTFIIIA基因具有一个可译框架，其中包含1269个核苷酸(核酸)，它编码423个氨基酸残基，如下面SEQ ID NO1所示，其特征为编码9个C2H2型锌指纹区。当与XenoDus TF IIIA基因比较时，它显示出在核酸方面有63％的同源性，在氨基酸方面有58％的同源性。由本专利技术基因编码的hTFIIIA认为可发挥DNA结合蛋白质的生物学作用，所说的基因用途是作为一种转录调节因子。具体地说，本专利技术的基因一般在各种组织中表达，因此，在涉及维持生命和控制功能的5S核糖体RNA基因转录和维持其他基因的稳定转录中可能发挥着重要作用。尤其最近逐渐了解到大量疾病伴随着转录控制的紊乱。例如，许多癌基因产物充当转录调节因子，其中的紊乱导致细胞的癌变。早幼粒细胞白血病，染色体转位导致转录控制的紊乱，随后引起癌变。调节因子Hox2.4的高水平表达诱导小鼠白血病。因此，现在已知在许多遗传疾病中有关蛋白质显示无异常，但其病理学机理涉及一种基因的异常，该基因涉及所说蛋白质之基因表达所需的转录控制。经研究这些基因的异常(DNA诊断等)。可以鉴定遗传疾病，其发病机理的分析还没有足够的进展。本专利技术的基因在该领域中是有用的。本专利技术的基因在使用一种反意DNA通过转录控制来进行的疾病治疗中或在分析其作用机理中也是有用的。另外，TFIIIA涉及5S RNA的转录控制，因此，该转录控制的紊乱直接导致有关蛋白质合成的紊乱。许多表现为一种蛋白质数量异常的遗传疾病可能是由该蛋白质合成的紊乱所引起的。因此，本专利技术的基因预期在解释该疾病中也是有用的。本专利技术的基因以单链DNA序列的形式来代表，如SEQ ID N02所示，因此在其范围内，本专利技术包括与该单链DNA序列互补的DNA序列以及两种都包含的成份。下面SEQ ID NO2所示的DNA序列和代表本专利技术的基因是分别编码根据下面SEQ ID NO1所示的氨基酸序列的氨基酸残基之密码的结合的一个例子。当然，本专利技术的基因不限于此，还可以具有任一DNA碱基序列，该序列包含一些氨基酸残基各自密码子的其他任意结合而不改变上述氨基酸顺序。可按常规方式进行密码子的选择，例如考虑密码子在所用宿主中的使用频率。本专利技术的基因还包含编码上述氨基酸序列的等效物的DNA序列，该等效物是经缺失和/或取代至少一个氨基酸或其部分氨基酸序列，或经增加至少一个氨基酸或氨基酸序列进行修饰得到的，并且有与hTFIIIA相似的生物学活性。这些等效物可以自发产生或经转录后修饰产生或还可以经使用定点突变技术修饰天然基因(本专利技术的基因)，经使用化学合成技术如磷酸三酯法和磷酰胺方法，或以这些方法的组合来生产。经使用本专利技术的基因，即例如将它插入一种微生物载体中并培养因此转化的微生物，这可以很容易引起hTFIIIA的大量表达并随后分离和提供所述的蛋白质。根据本文所公开的本专利技术基因的序列资料。使用一般的遗传工程技术，其他人可以很容易地生产本专利技术的基因。例如，可以使用合适的探针或本专利技术基因的特异性抗体从人cDNA文库(从含编码hTFIIIA的基因合适的原始细胞中按常规方法制备)中挑选所需克隆来生产所说的基因。用于上述程序的原始细胞的例子可以是所提到的各种细胞和组织，和其培养细胞，它们允许hTFIIIA基因的表达。从其中分离总RNA，按常规方法进行mRNA的分离和纯化，其转变成(合成)cDNA，cDNA的克隆以及其他步骤。另外，在本专利技术的实施中，cDNA文库可作为一种商品购买到。例如，该cDNA文库可以使用从Clontech买到的各种cDNA文库。可按上面提到的常规方法从该cDNA文库中完成对本专利技术基因的筛选。作为筛选方法，可以被提及的有例如，包含使用一种抗-hTFIIIA特异性抗体来抗cDNA产生的蛋白质，以Western印迹方式挑选出相应的cDNA克隆的方法；包含使用一种与目标DNA序列选择性结合的探钟的Southern印迹方法；Northern印迹方法，及其组合。一般来说，例如根据本专利技术基因的DNA序列资料化学合成的DNA序列在这里用作探针。当然，还可以使用已经获得的本专利技术基因或其片段作为探针。在获得本专利技术基因的过程中，包含PCR技术的DNA/RNA放大方法也能被成功地适用。特别在那些全长cDNA不能从文库中获得的例子中，可适合运用RAGE技术。在运用该PCR技术中所用的引物可根据本专利技术基因序列的资料来进行适当的设计，也可用共知的常规方法来合成。放大的DNA/RNA片段可按上面提到的常规方式如经凝胶电泳进行分离和纯化。按常规方式，例如以双脱氧法或Maxam-Gilbert法可测定本专利技术基因或其各种DNA片段中任意一种的碱基序列。该碱基序列的测定也可用以商品的形式可购买到的测序试剂盒或相似物很容易地测出。因此获得了cDNA的全部DNA碱基序列，将它命名为克隆OTK7并作为本专利技术基因的一个例子，如下面SEQ ID NO3所示。由所说cDNA编码的hTFIIIA氨基酸序列如下面SEQ ID NO1所示。根据本专利技术，提供了一种筛选hTFIIIA基因的方法，包括使用本专利技术基因的一部分作为探针。例如可使用一种任意引物DNA标记试剂盒(从Takara Shuzo，Amersham，等可买到)，利用任意引物DNA标记技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人转录因子ＩＩＩＡ基因，它编码ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶１所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：藤原力，武田圣，田良和，尾崎浩一，申贞均，
申请(专利权)人：大制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]