诱导针对遗传趋异性HIV-1毒株的中和性抗体的肽制造技术

一种肽，该肽能够诱导对ＨＩＶ－１的不同毒株和／或临床分离物具有中和活性并且／或者能抑制由ＨＩＶ－１引起的细胞融合的抗体，该肽的特征在于，该肽由选自ＥＬＤＫＷＡＳ、ＬＥＬＤＫＷＡＳ、ＥＬＤＮＷＡＳ、ＥＬＮＫＷＡＳ、ＬＥＬＤＮＷＡＳ和ＬＥＬＮＫＷＡＳ的氨基酸顺序组成。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及能够诱导针对HIV-1的不同毒株和临床分离物的中和性抗体的肽、以及用该肽诱导出的抗体，还涉及能把这些肽有效呈递给免疫系统的肽-载体结合物的制备。更具体地说，本专利技术涉及针对HIV-1的疫苗的建立。获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)是一型人免疫缺陷病毒(HIV-1)长期持续性感染的后期临床表现。持续感染期间针对该病毒及病毒感染细胞的免疫反应通常不能介导感染的消除。疫苗会诱导出免疫反应，这些免疫反应能防止持续感染的确立，甚至能防止发展为艾滋病。多数针对HIV-1的疫苗都着眼于其表面糖蛋白gp160，该蛋白由gp120和gp41组成，负责病毒与细胞受体CD4的结合，并负责触发后续的融合活性。然而，就gp160而言，所观察到的一些现象反对用整个gp160或gp120作为免疫原的作法提出了异议。体外实验表明，gp120和gp120特异性抗体之间的协同作用阻断了人T细胞的活化(Mittler等人，Science2451380，1989)。此外，已知gp160上的一些抗原区能诱导增强HIV-1感染的抗体(Jiang等，J.Exp.Med.1741557，1991)。用合成肽作免疫原有许多优点。合成肽诱导的抗体具有预定的特异性，在病毒的情况下，可以对合成肽加以选择使其具有病毒粒子表面的结构。合成多肽的有趣之处还在于它们能诱导正常条件下看不到的抗体反应。例如，有可能诱导出比整个蛋白诱导出的抗体反应范围更宽的中和性抗体(Green等人，Cell28477，1982)。此外，已证明含有HIV-1分离物HIV-1IIIb的gp120的部分V3环的肽所诱导出的抗体，能预防黑猩猩免受该HIV-1分离物的侵染(Emini等，Nature355728，1992)。由于合成肽本身的免疫原性差，必须使其与具有佐剂作用的分子如破伤风类毒素或钥孔血蓝蛋白偶联(Bittle等人，Nature29830，1982)。另一种作法是克隆一些与日本裂体吸虫谷胱甘肽S-转移酶融合的蛋白形式的小肽(Fikrig等人，Science250553，1990)。另外，诸如牛痘病毒、脊髓灰质炎病毒或流感病毒等病毒，可以作为免疫原的载体使用。用含有乙型肝炎表面抗原(HBsAg)顺序、单纯性疱疹病毒糖蛋白D顺序及流感病毒血细胞凝集素顺序的重组牛痘病毒接种的家兔，产生针对所有上述三种外来抗原的抗体(Perkus等人，Science229981，1985)。此外，表达HIV-1的gp41上的抗原决定基的嵌合脊髓灰质炎病毒，能在家兔体内成功诱导出针对HIV-1的中和性抗体(Evans等人，Nature339385，1989)。最近以来，也有可能用体外诱变法改变流感病毒的基因组(Enami等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA873802，1990)。借助这一技术，有可能加工出一种稳定的减毒甲型流感病毒(Muster等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA885177，1991)。在这方面，流感病毒的优点是可以得到许多变异体，从而有可能进行反复的接种。另外，流感病毒能诱导出强的体液免疫和细胞免疫反应，这对抗HIV-1疫苗途径是有利的。本专利技术的目的是提供一些就整个gp160而言只略有免疫原性的肽顺序，这些肽顺序可用于诱导对HIV-1的不同毒株和/或临床分离物具有中和活性并且/或者能抑制哺乳动物体内由HIV-1引起的细胞融合的抗体。本专利技术的另一目的是提供诱导由粘膜表面分泌的针对HIV-1病毒和病毒感染细胞的分泌抗体的方法。本专利技术假定，在粘膜组织中诱导抗HIV-1 IgA抗体特别为预防和防止有潜在危险个体的HIV-1感染提供了一种有力的工具，因为包括HIV-1在内的许多病毒感染都是通过呼吸道、胃肠道和生殖道的粘膜表面传播的。达到上述目的的方法是制备由化学合成法或微生物学方法得到的7或8个氨基酸的小肽，这些肽优选是由编码以下顺序的核酸顺序衍生的Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser(单字母代码为ELDKWAS)、Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser(LELDKWAS)、Glu Leu Asn Lys TrpAla Ser(ELNKWAS)、Leu Glu Leu Asn Lys Trp AlaSer(LELNKWAS)、Glu Leu Asp Asn Trp Ala Ser(ELDNWAS)或LeuGlu Leu Asp Asn Trp Ala Ser(LELDNWAS)。然后，可以将上述6个氨基酸顺序中的至少一个(优选所有的)有效地呈递给免疫系统，以便诱导抗体的形成和释放，这些抗体对HIV-1毒株具有中和活性并且/或者能抑制由这些病毒引起的细胞融合。本专利技术的主要目标是提供一种有前途的抗HIV-1疫苗，这种疫苗是以含有至少一种上述肽，优选含有所述上述六种肽的混合物的制剂为基础的。本专利技术的特有特征和优选实施方案描述如下。在本专利技术的一个优选实施方案中，使限定人单克隆抗体2F5(由杂交瘤细胞系2F5制得，该细胞系的PHLS保藏号为90091704，保藏日为1990年9月17日)抗原决定基顺序的氨基酸顺序Glu Leu AspLys Trp Ala(ELDKWA)，与位于gp41上限定2F5抗原决定基的ELDKWA顺序附近的Ser或Leu与Ser二者连接，从而分别建立肽顺序Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser(ELDKWAS)和Leu Glu Leu Asp LysTrp Ala Ser(LELDKWAS)，再将其插入到载体分子即流感病毒HA的抗原位点B中。经修饰的携有外源氨基酸顺序ELDKWAS或LELDKWAS的“嵌合”HA融合蛋白，在优选以注射形式施用于哺乳动物特别是人的免疫系统后，能非常有效地诱导出针对所呈递的ELDKWAS或LELDKWAS顺序的抗体。用该方法得到的抗体对HIV-1的不同毒株和/或临床分离物具有中和活性。然而，现已证明，由于已知的HIV-1病毒的多形性，甚至gp41的高度保守的(L)ELDKWAS氨基酸顺序内也会发生突变，而这一顺序相应于HIV-1分离物BH10的氨基酸661-668(LELDKWAS)或662-668(ELDKWAS)。本说明书中采用的核苷酸和氨基酸编号相应于Los Alamos数据库中采用的HIV-1分离物BH10的gp160的编号(Myers等人，Data Base Human Retrovirusand Aids)。这些突变尤其影响所述顺序中间的Asp(D)和/或Lys(K)氨基酸，从而降低了病毒对被携有2F5抗原决定基的抗体中和的敏感性。然而，用本专利技术的一些肽能成功克服这种不希望的病毒回避机制，这些肽中Asp(D)或相邻的Lys(K)被天冬酰胺(N)置换。可以利用至少一种所述肽，优选所有六种所述肽的混合物，制备用于诱导抗体的药物，这些抗体对HIV-1的不同毒株和/或临床分离物具有中和活性，并且/或者能抑制HIV-1引起的细胞融合。在另一个实施方案中，可以使用同样的肽来制备一种药物，这种药物在优选鼻内施用于哺乳动物后能诱导出由粘膜表面分泌的抗HIV-1 IgA抗体。这些肽既可以每种肽单独使用，也可以与至少一种其他所述肽混合使用。在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：H·卡廷格，T·穆斯特，
申请(专利权)人：波利门科学生物免疫研究有限公司，
类型：发明
国别省市：